生物化学 -第四章 酶.ppt

6、活性部位微环境的影响某些酶的活性中心穴内相对是非极性的，催化基团被低介电环境包围，并排除高极性的水分子。这样，底物分子的敏感键和酶的催化基团之间就会有很大的反应力。水会减弱极性基团间的相互作用。水的极性和形成氢键的能力很大，水的介电常数极高。这种高极性使它在离子外形成定向的溶剂层，产生自身的电场，从而大大减少了它所所包围的离子间的静电作用或氢键作用。三、酶催化反应机制的实例1、溶菌酶溶菌酶的生物学功能是催化细菌细胞壁多糖的水解。（1）细胞壁多糖：N-乙酰氨基葡萄糖（NAG）-N-乙酰氨基葡萄糖乳酸（NAM）的共聚物，NAG与NAM以β-1,4糖苷键交替排列。??溶菌酶N-乙酰胞璧酸:N-乙酰葡糖胺与乳酸形成的醚类（2）溶菌酶的最适小分子底物：为NAG-NAM交替的六糖，以A、B、C、D、E、F表示，其中D是NAM。（3）溶菌酶分子中有一个狭长的凹穴，正适合于小分子底物的嵌合。凹穴中的Glu35和Asp52是活性中心的氨基酸残基。（4）作用原理当酶与细胞壁接触时，与六个暴露在外的氨基糖残基结合。此时酶的构象发生变化，Glu35和Asp52相互靠近，并与底物的D糖起“靠近”和“定向”效应：Asp52羧基上的一个氧原子距离D环上的C1及D环上的氧原子只有0.3nm，Glu35羧基上的一个氧原子距离D糖的糖苷键上的氧原子也只有0.3nm；同时，在酶作用下，D糖构象也发生变形，由正常椅式变成能量较高的半椅式或船式构象。结合后，Glu35由于处于非极性区，呈不解离状态-COOH，这样它可以起着广义酸催化作用，提供一个质子给糖苷键的氧原子，使得氧原子与D环C1间的糖苷键断开，而C1带上正电荷，成为正碳原子C1+。处于极性区的Asp52在通常情况下呈离子化状态-COO-，这样它就起着稳定C1+的作用，协调C1-O间糖苷键的断裂，直到环境中水分子的OH-与C1+结合，H+与Glu35结合，使两者恢复非离子化形式。由此完成一次水解反应。2、胰凝乳蛋白酶(1)专一性地水解芳香族氨基酸和大的疏水氨基酸的羧基形成的肽键。（2）胰凝乳蛋白酶的活性中心由Ser195、His57和Asp102组成，其中Ser195是酶活性中心的底物结合部位，His57是活性中心内的催化部位，在三维结构中这三个氨基酸残基是十分靠近的。（3）胰凝乳蛋白酶作用原理活性中心的Ser195、His57及Asp102构成一个氢键体系，使His57的咪唑基成为Asp102羧基及Ser195羟基间的桥梁，Ser195由于His57及Asp102的影响而成为很强的亲核基团，易于提供电子。这个氢键体系称为“电荷中继网”。在大部分情况下，网中Asp102以离子化形式-COO-，Ser195以非离子化形式-CH2OH存在；但也有另一种情况，即由于Asp102从Ser195吸引一个质子所造成，想接力赛跑那样，质子先从Ser195传递到His57上，再由His57传递到Asp102上。在此酶促反应中，His57咪唑基起着广义酸碱催化作用：先促进Ser195的羟基亲核地附着到底物敏感肽键的羰基碳原子上，形成共价的酰化中间物，再促进酰化的ES中间物上的酰基转移到水或其他的酰基受体（如醇，氨基酸等）上。其对多肽底物水解可分两个阶段：竞争性抑制：非竞争性抑制：反竞争性抑制：竞争性抑制改变横截距（Km变大），非竞争性抑制改变纵截距（Vmax变小）；反竞争性抑制，Km和Vmax值均减小。【例题2】假设浓度为2×10-5mol/L的某抑制剂抑制了一个酶催化反应的75%，求这个非竞争性抑制的Ki?【解】已知:[I]=2×10-5mol/L，V’max/Vmax=0.25V’max/Vmax=1/(1+[I]/Ki)=1/(1+2×10-5/Ki)=0.25所以:Ki=6.7×10-5mol/L三、温度对酶反应的影响1、酶的最适温度：酶达到最大反应速度时的温度最适温度是酶的特征之一，但不是一个特征常数，它与反应时间、溶液的离子强度、缓冲溶液种类有关最适温度2、温度对酶促反应的影响温度升高,酶促反应速度加快；另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。因此酶的最适合温度是二者平衡的结果.3、大部分酶在60Co以上失活变性。一般动物酶的最适温度在35-40Co，植物酶的最适温度在40-50Co。少数酶能耐受