竹叶花椒中内参基因在不同组织和胁迫下的验证与筛选.docxVIP

竹叶花椒中内参基因在不同组织和胁迫下的验证与筛选

目录

竹叶花椒中内参基因在不同组织和胁迫下的验证与筛选（1）．．．．．．4

研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1竹叶花椒的生物学特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2基因在植物生长发育中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3内参基因的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1竹叶花椒样本的采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.2基因表达量的测定技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2.1实时荧光定量PCR方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2.2RTqPCR操作流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.3胁迫处理方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.3.1盐胁迫．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.3.2糖胁迫．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.3.3温度胁迫．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

竹叶花椒内参基因的筛选与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

3.1基因序列的获取与生物信息学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

3.1.1基因序列的同源性比对．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

3.1.2基因结构域分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

3.2基因表达稳定性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.2.1不同组织中的表达稳定性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

3.2.2不同胁迫条件下的表达稳定性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

3.3内参基因的选择与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

3.3.1基于表达稳定性的内参基因筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.3.2内参基因的实时荧光定量PCR验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

竹叶花椒内参基因在不同组织中的表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．33

4.1常规组织中的表达模式．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

4.2特殊组织中的表达模式．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

4.2.1花器官．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

4.2.2果实发育期．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

4.3表达量差异分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

竹叶花椒内参基因在胁迫条件下的表达响应．．．．．．．．．．．．．．．．．41

5.1盐胁迫下的表达响应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

5.2糖胁迫下的表达响应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

5.3温度胁迫下的表达响应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

5.3.1高温胁迫．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

5.3.2低温胁迫．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

结果讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

6.1内参基因的选择对后续研究的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52

6.2胁迫条件下基因表达模式的变化．．．．．．．．．．．．．．．．．