动物疫病鉴别检测技术 第2部分：兔出血症病毒经典型与兔出血症病毒2型 DB37 T 4754.2—2024.pdf

ICS11.220

CCSB41

37

山东省地方标准

DB37/T4754.2—2024

动物疫病鉴别检测技术第2部分：兔出

血症病毒经典型与兔出血症病毒2型

Animaldiseaseidentificationanddetectiontechnology—Part2:RHDVandRHDV2

2024-12-30发布2025-01-30实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T4754.2—2024

动物疫病鉴别检测技术第2部分：兔出血症病毒经典型与兔出血

症病毒2型

1范围

本文件描述了兔出血症病毒（Rabbithaemorrhagicdiseasevirus,RHDV）经典型与兔出血症病毒

2型（Rabbithaemorrhagicdiseasevirus2,RHDV2）实时荧光反转录聚合酶链反应（Real-timeRT-

PCR）鉴别检测方法。

本文件适用于兔及其产品中RHDV经典型与RHDV2型的鉴别检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4试验原理

在游离状态下，SYBRGreenⅠ染料只发出微弱的荧光，与双链DNA结合后荧光信号大幅度增强。在

PCR反应过程中，SYBRGreenI染料与扩增的双链DNA产物结合后发出荧光，且伴随扩增产物的指数型上

升，荧光强度也随之上升并被荧光PCR仪检测从而获得荧光扩增曲线，之后进行扩增产物熔解温度（Tm）

曲线分析，由于扩增产物GC含量差异导致Tm值不同。本文件引物可通用检测RHDV经典型与RHDV2型靶基

因，但由于RHDV经典型扩增产物GC含量高于RHDV2型扩增产物，导致Tm值明显高于后者，并依此适用于

RHDV经典型与RHDV2型的鉴别检测。

5试剂或材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯。

水：GB/T6682，一级。

TRIzol试剂。

氯仿。

异丙醇。

反转录酶M-MuLV及5×反转录酶反应缓冲液：反转录酶浓度200U/µL，均-20℃保存。

RNA酶抑制剂：50U/µL，-20℃保存。

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DB37/T4754.2—2024

脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）：为dATP、dGTP、dCTP、dTTP混合物，均为10mmol/L。

2×SYBRGreenⅠPCRMix：-20℃保存。

75%乙醇。

取无水乙醇75mL，加灭菌水至100mL，混匀，室温保存。

焦碳酸二乙酯（DEPC）水。

取1mLDEPC加入水中至1000mL，充分震荡混匀，静置24h后，121℃高压灭菌15min，4℃保存备

用。

磷酸盐缓冲溶液（PBS）。

取NaCl8g，KCl0.2g，KHPO0.2g，NaHPO･12HO2.9g，依次溶于800mL水中，用盐酸