临床基因扩增检验实验PCR培训班考试题卷.docxVIP

临床基因扩增检验实验PCR培训班考试题卷

一、选择题（每题3分，共30分）

1.以下哪种物质不是PCR反应所必需的？（）

A.引物

B.模板DNA

C.TaqDNA聚合酶

D.核糖核苷酸

答案：D。PCR反应的原料是脱氧核糖核苷酸，而核糖核苷酸是合成RNA的原料，引物用于引导DNA合成，模板DNA是扩增的对象，TaqDNA聚合酶负责催化DNA链的延伸，所以选D。

2.PCR反应中变性温度一般为（）

A.55℃

B.72℃

C.94℃

D.60℃

答案：C。变性步骤是使双链DNA解开成单链，通常需要较高的温度，一般为94℃左右，55℃60℃常用于退火，72℃是延伸温度，所以选C。

3.以下关于引物设计的原则，错误的是（）

A.引物长度一般为1825bp

B.引物的GC含量一般在40%60%

C.引物可以与模板DNA的非目的区域互补

D.引物自身不能形成二级结构

答案：C。引物应特异性地与模板DNA的目的区域互补，若与非目的区域互补会导致非特异性扩增，引物长度一般1825bp较合适，GC含量40%60%有助于保证引物与模板的结合稳定性，引物自身不能形成二级结构，否则会影响其与模板的结合，所以选C。

4.实时荧光定量PCR技术中，SYBRGreen荧光染料的作用是（）

A.特异性结合双链DNA

B.特异性结合单链DNA

C.特异性结合RNA

D.结合蛋白质

答案：A。SYBRGreen荧光染料能特异性地结合双链DNA，当它与双链DNA结合后荧光信号增强，通过检测荧光信号的变化来实时监测PCR产物的扩增情况，不与单链DNA、RNA或蛋白质特异性结合，所以选A。

5.在PCR反应体系中，Mg2?的作用是（）

A.激活TaqDNA聚合酶

B.稳定模板DNA

C.防止引物二聚体形成

D.调节反应体系的pH值

答案：A。Mg2?是TaqDNA聚合酶的激活剂，能增强其活性，对模板DNA的稳定性、防止引物二聚体形成以及调节反应体系pH值并无直接作用，所以选A。

6.PCR产物的特异性取决于（）

A.模板DNA的纯度

B.TaqDNA聚合酶的活性

C.引物的特异性

D.反应体系的pH值

答案：C。引物的特异性决定了它能准确地与模板DNA的目的区域结合，从而引导TaqDNA聚合酶进行特异性扩增，模板DNA纯度、TaqDNA聚合酶活性和反应体系pH值虽也会影响PCR反应，但不是决定产物特异性的关键因素，所以选C。

7.下列哪种情况会导致PCR产物出现非特异性条带？（）

A.引物特异性高

B.退火温度合适

C.模板DNA量过少

D.循环次数过多

答案：D。循环次数过多会增加非特异性扩增的机会，导致出现非特异性条带。引物特异性高、退火温度合适有利于特异性扩增，模板DNA量过少可能导致扩增产物量不足，但一般不会直接导致非特异性条带，所以选D。

8.逆转录PCR（RTPCR）的第一步是（）

A.以RNA为模板合成cDNA

B.以cDNA为模板进行PCR扩增

C.提取RNA

D.设计引物

答案：A。RTPCR首先要将RNA逆转录为cDNA，然后再以cDNA为模板进行PCR扩增，提取RNA是前期准备工作，设计引物是在进行反应前就需要完成的，但第一步关键操作是以RNA为模板合成cDNA，所以选A。

9.多重PCR是指在一个反应体系中同时扩增（）

A.多个不同的目的基因

B.同一个目的基因的多个片段

C.多个相同的目的基因

D.以上都不对

答案：A。多重PCR技术的特点是在一个反应体系中加入多对引物，同时扩增多个不同的目的基因，而不是同一个目的基因的多个片段或多个相同的目的基因，所以选A。

10.PCR反应的基本步骤顺序是（）

A.退火变性延伸

B.变性退火延伸

C.延伸变性退火

D.变性延伸退火

答案：B。PCR反应首先是变性，使双链DNA解开成单链；然后退火，引物与单链模板结合；最后延伸，TaqDNA聚合酶催化合成新的DNA链，所以顺序是变性退火延伸，选B。

二、填空题（每题3分，共30分）

1.PCR反应的三个基本步骤是变性、______和延伸。

答案：退火。这是PCR反应的标准流程步骤，变性使双链解开，退火让引物结合模板，延伸合成新的DNA链。

2.实时荧光定量