分离条件的选择.ppt

（三）定量方法1．歸一化法2．外標法3．內標法4．內標對比法1．歸一化法前提：試樣中所有組分都產生信號並能檢出色譜峰依據：組分含量與峰面積成正比優點：簡便，準確定量結果與進樣量、重複性無關（前提→柱子不超載）色譜條件略有變化對結果幾乎無影響缺點：所有組分必須在一定時間內都出峰必須已知所有組分的校正因數不適合微量組分的測定2．外標法：以待測組分純品為對照物，與試樣中待測

組分的回應信號相比較進行定量的方法a．工作曲線法：i純品→工作曲線，同體積樣品與之比較c前提：進入檢測器樣品量與峰面積成正比b．外標一點法：一種濃度對照物對比樣品中待測組分含量前提：截距為0，對照品濃度與待測組分濃度接近c．外標兩點法：前提：選取兩點對照品的濃度，需涵蓋待測濃度外標法特點：1）不需要校正因數，不需要所有組分出峰2）結果受進樣量、進樣重複性和操作條件影響大→每次進樣量應一致，否則產生誤差圖示back分離條件的選擇一、分離度（解析度）及影響因素二、實驗條件的選擇一、分離度（解析度）及影響因素1．分離度定義式2．影響分離的因素（分離方程，分離度計算式）1．分離度定義式分離度：相臨兩組分間峰頂間距離是峰底寬平均值的幾倍（衡量色譜分離條件優劣的參數）討論：2．影響分離的因素（計算式）前提——定義式基礎上，相鄰兩組分的n一致（假設）柱選擇項柱容量項柱效項a．柱效項及其影響因素：影響色譜峰的寬窄主要取決於色譜柱性能及載氣流速續前討論：增加柱效是提高分離度的一個直接有效手段提高柱效、改善分離的途徑：增加柱長；降低板高根據速率理論，降低板高、提高柱效的方法是：1）採用粒度較小、均勻填充的固定相（A項↓）2）分配色譜應控制固定液液膜厚度（C項↓）3）適宜的操作條件：流動相的性質和流速，柱溫等等（B項↓）選用分子量較大、線速度較小的載氣——N2氣，控制較低的柱溫b．柱選擇項及其影響因素：影響峰的間距主要受固定相性質，以及柱溫影響續前討論：增大柱選擇性是改善分離度的最有力手段氣相色譜中，柱選擇性取決於固定相性質和柱溫選擇合適的固定相使與不同組分的作用產生差別才能實現分離一般說，降低柱溫可以增大柱的選擇性c．柱容量項及其影響因素：影響峰位主要受固定相用量、柱溫和載氣流速的影響續前討論：綜合考慮分離度、分離時間和峰檢測幾項因素控制k的最佳範圍2~5GC中，增加固定液用量和降低柱溫可以增加k圖示k影響峰位n影響峰寬窄α影響兩峰間距練習如何根據具體情況改進分離度？α太小，兩組分未分開應改變固定相極性，降低柱溫k太小，n也太小，應增大固定液用量，降低柱溫n太小，許多組分未分開應設法降低板高，提高柱效二、實驗條件的選擇：色譜條件包括分離條件和操作條件分離條件是指色譜柱操作條件是指載氣流速、進樣條件及檢測器1．色譜柱的選擇2．柱溫的選擇3．載氣與流速的選擇4．進樣條件的選擇1．色譜柱的選擇（以氣液分配色譜為主）（1）固定相的選擇（2）柱長的選擇（1）固定相的選擇固定液的選擇：1）按“相似相溶”原則：極性相似或官能團相似2）按組分性質主要差別：沸點相差大的選非極性固定液沸點相差小的選極性固定液3）柱溫固定液最高使用溫度——防止固定液流失載體的選擇：種類，粒度，分佈續前固定液配比的選擇：高沸點組分→比表面積小的載體低固定液配比（1%~3%）低柱溫低沸點組分→高固定液配比（5%~25%）加大k值，達到良好分離難分離組分→毛細管柱（2）柱長的選擇注：根據R1.5選擇L，一般較短(0.6~6m)不可以無限延長柱子練習例：兩組分在1m長柱子上的分離度為0.75，問使用多長柱子可以使它們完全分離？解：2．柱溫的選擇原則：1）在能保證R的前提下，儘量使用低柱溫，但應保證適宜的tR及峰不拖尾，減小檢測本底2）根據樣品沸點情況選擇合適柱溫柱溫應低於組分沸點50~1000C寬沸程樣品應採用程式升溫續前程