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单核－巨噬细胞吞噬功能测定

单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因

此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态

具有重要意义。

小鼠巨噬细胞吞噬功能试验(体外法）

1、原理

巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物

(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等）共同温育，染色，

在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指

数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状

态。

2、方法

（1)．小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注

射1%可溶性淀粉1ml.实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘

酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起

腹膜剪开一小口（注意避开血管）用生理盐水（或1640）灌

注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4ml）,1500r/min,离心10

min，去上清,沉积细胞用生理盐水(或1640）洗二次，离心

转速、时间同上。最后沉积细胞用含10%小牛血清1640配

成适当浓度备用(1～2×106／m）。

（2)被吞噬物的制备

1)．鸡红细胞制备从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量

Alsever液（2。05g葡萄糖，0.42gNaC，0.8g枸橼酸钠

5HO、0。55g枸椽酸，加双蒸水到100m，加热溶解后过

2

滤分装，8磅高压灭菌，4℃保存）,置4℃可以保存1个月。

用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1％的浓

度备用。

2）．白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培

养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，

100℃,煮沸30min灭活，离心去掉上清，再用1%美兰染色

30min,用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／m

菌悬液，4℃冰箱保存备用.

3、操作

取巨噬细胞0.5m加1％鸡红细胞或×l08／m白色念

珠菌悬液0。5m，置37℃温育30min。取2滴混合液置玻

片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000r／min，

10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片,甲醇固定，姬姆萨染色、

油镜观察计数。

吞噬率％=（吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞)×

100%

吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞总数/100个巨

噬细胞＊＊（吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)

(三)小鼠巨噬细胞吞噬功能试验(体内法)

[原理]

巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性,通常选用鸡红细

胞作为吞噬颗粒，将其注入小鼠腹腔中，腹腔中巨噬细胞则

将鸡红细胞吞入.取小鼠腹腔液涂片、染色后可见鸡红细胞被

吞噬的现象，计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞的细胞数

可判断其吞噬功能。

[材料］

1．1％鸡红细胞悬液。

2．小白鼠。

3．6％可溶性淀粉肉汤肉汤培养液100m1加入可溶

性淀粉6g，混匀后煮沸灭菌

4．瑞氏染液。

5．解剖小器械一套、无菌注射器、显微镜等.

[方法]

1．试验前3天，于小白鼠腹腔内注射6％可溶性淀粉肉

汤1ml。

2．试验当天于每只小鼠腹腔内注射0.5ml1％鸡红细胞

悬液，并轻揉腹部。

3.注射后30min，将小鼠处死、取腹腔液涂片并行瑞

氏染色。

4．油镜观察涂片。

[结果观察]

镜下可见吞噬细胞细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细

胞胞浆呈红色，而核则染成蓝色(鸡红细胞有细胞核)。计数

100个吞噬细胞，并计算吞噬阳性细胞的百分率。

［注意事项］

1．小白鼠腹腔注射时注意不要刺伤内脏。

2．如小鼠腹腔液过少时，可注入适量的生理盐水。

3．被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短则

尚未被吞噬，因此须掌握好时间。