3.2基因工程的基本操作程序第1课时课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

基因工程基因工程的基本操作程序

【学习目标】1.简述目的基因的筛选和获取方法2.简述PCR的原理、条件及过程【重难点】利用PCR获取和扩增目的基因

转基因抗虫棉(使棉铃虫死亡，左）与非转基因抗虫棉（右）1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？从社会中来

目的基因的筛选与获取

苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家通过实验，将该细菌的“杀虫基因”转到棉花里，让棉花也能产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。这个“杀虫基因”就是培育转基因抗虫棉用到的目的基因——Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因

第一步：目的基因的筛选与获取目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因主要指编码蛋白质的基因目的基因的种类：根据需求的不同，目的基因也不同，如生物抗逆性、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因那么，如何筛选与获取目的基因呢？

第一步：目的基因的筛选与获取（筛选合适的目的基因）随着测序技术的发展，以及序列数据库（GenBanK）、序列比对工具（如BLAST）等的应用，越来越多的基因的结构和功能为人们所知，为找到合适的目的基因提供了更多的机会和可能从相关的已知结构和功能清晰地基因中进行筛选是较为有效的方法

第一步：目的基因的筛选与获取1.通过化学方法直接人工合成目的基因获取目的基因的方法DNA合成仪要求：①基因比较小②核苷酸序列已知的基因2.通过构建基因文库获取目的基因基因文库种类：①基因组文库（包含一种生物的所有基因）②部分基因文库（只包含一种生物的部分基因，如cDNA文库）

第一步：目的基因的筛选与获取拓展：基因文库的构建过程某生物体全部DNA许多DNA片段受体菌群体限制酶与载体连接、导入受体菌群体cDNA某生物体发育的某个时期的mRNA逆转录与载体连接、导入基因组文库cDNA文库

第一步：目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因（常用）苏云金杆菌Bt基因？快速获得大量Bt基因提取前提：已知目的基因或其上下游的核苷酸序列引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸（长度通常为20-30个核苷酸）⑴全称：聚合酶链式反应⑵原理：DNA的半保留复制（在体外大量复制目的基因的核苷酸序列）⑶原料：DNA模版、引物、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶

第一步：目的基因的筛选与获取复习回顾：DNA复制碱基互补配对原则（A与T、C与G配对保证复制的准确进行）(2)条件:4种游离的脱氧核苷酸DNA的两条链DNA解旋酶、DNA聚合酶等ATP(3)复制原则:能量：模板：原料：酶：半保留复制、边解旋边复制(1)特点:合成子链解旋形成新DNA解旋酶DNA聚合酶

第一步：目的基因的筛选与获取

第一步：目的基因的筛选与获取DNA复制和PCR反应的条件对比解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（通常为小的单链RNA）无需解旋酶，用高温代替DNA（目的基因）模板4种脱氧核苷酸（dNTP)耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）引物（通常为小的单链DNA至少需要2种引物）反应还需要其它条件，如控温系统、缓冲液（一般添加Mg2+）---能够调节pH，激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶

第一步：目的基因的筛选与获取（5）PCR扩增的过程5’3’3’5’3’5’5’3’变性双螺旋解开PCR仪①变性：当温度超过90℃时，双链DNA解旋为单链

第一步：目的基因的筛选与获取②复性：温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合5’3’3’5’复性3’5’两种引物3’5’注意：复性温度过高会破坏引物与模板碱基互补配对复性温度过低，会造成引物与模板结合位点增加，导致非特异性产物增加

第一步：目的基因的筛选与获取③延伸：当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链5’3’3’5’延伸3’5’3’5’5’3’3’5’

第一步：目的基因的筛选与获取3’5’3’5’5’3’3’5’第一轮循环的产物作为第二轮反应模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环产物5’3’5’3’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’5’3’

第一步：目的基因的筛选与获取5’3’5’3’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’5’3’第二轮循环的产物作为第三轮反应模板，经过变性、复性和延伸三步产生第三轮循环产物5’3’3’5’5’3’3’5’5’3’3’5’5’3’3’5’