DNA的生物合成课件.pptxVIP

DNA的生物合成;DNA;DNA複製的概念:;複製的基本規律;複製的基本規律;一、半保留複製;圖12-1DNA複製理論上有三種可能形式;1958,M.MmlsonF.W.Stahl設計的實驗;按半保留複製方式，子代DNA與親代DNA的堿基序列一致，即子代保留了親代的全部遺傳資訊，體現了遺傳的保守性。;二、雙向複製;ori是指DNA複製起始時必需的一段特殊DNA序列。共同特徵：;A.環狀雙鏈DNA及複製起始點

B.複製中的兩個複製叉

C.複製接近終止點(termination,ter);;三、複製的半不連續性;半不連續性

複製過程中，領頭鏈連續複製，而隨從鏈不連續複製的現象。

岡崎片段(okazakifragment)

指不連續複製的片段

原核:1000~2000個核苷酸（nt）

(相當於1個順反子，即基因的大小)

真核:100~200個核苷酸（nt）

(相當於1個核小體DNA的大小);DNA複製的酶學和拓撲學變化;底物(substrate):

dATP,dGTP,dCTP,dTTP；(dNTP)

聚合酶(polymerase):

依賴DNA的DNA聚合酶，簡寫為DNA-pol；

範本(template):

解開成單鏈的DNA母鏈；

引物(primer):

提供3?-OH末端使dNTP可以依次聚合；

其他的酶和蛋白質因數。;一、複製的化學反應;活性：1.5??3?聚合酶活性，需要引物；

2.3??5?核酸外切酶活性。;DNA-pol的5′?3′聚合作用;3′?5′外切酶;（一）原核生物的DNA聚合酶;;功能：對複製中的錯誤進行校讀，對複製

和修復中出現的空隙進行填補。;只可沿5?→3?方向延長；;(2)DNA-polI3′?5′外切酶活性的功能;(3)DNA-polI5′?3′外切酶活性的功能;323個氨基酸;DNA-polⅡ（120kD）;*由A.Kornberg的二兒子TomB.Kornberg發現的。;DNA-polⅢ同時合成領頭鏈和隨從鏈;;三、複製的保真性(fidelity);四、複製中的解鏈和DNA分子拓撲學變化;種類：解旋酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和rep蛋白;解螺旋酶和單鏈DNA結合蛋白協同作用;（二）引物酶(primase);是一種可逆的核酸酶，它既能水解DNA分子中的磷酸二酯鍵，又能將其重新連接；可快速消除DNA解鏈過程中所產生的正超螺旋累積，使複製叉能夠順利前進。;原核和真核生物都發現了三類拓撲異構酶：;DNA正超螺旋與負超螺旋;切割DNA雙鏈，??時不需ATP；爾後由ATP供能，使DNA分子成負超螺旋再連接切口。;五、DNA連接酶(DNAligase);在複製中起最後接合缺口(雙鏈中的單鏈

缺口)的作用；

在DNA修復、重組及剪接過程中起縫合缺

口的作用；

基因工程的重要工具酶之一。;;DNA生物合成過程;（一）複製的起始(initiation);;;（二）複製的延長(elongation);領頭鏈：合成一段RNA引物（比岡崎片段的引物

略長），開始合成後通常一直繼續下去。;;在營養豐富培養基，E.Coli每20分鐘即可分裂一次；其基因組堿基數為4.6×106bp,DNA為單點雙向複製，可推算出複製速度約115kb/min(1,900bp/s)；;1.原核生物基因是環狀DNA，雙向複製的匯合

點就是複製的終止點。;2.終止區含有多個約22bp的終止子(terminator,ter);3.隨從鏈上不連續性片段的連接;WhenDNAreplicated,itsstrandsareseparatedbytheenzymehelicase.SinglestrandDNAbindingproteinkeepsthestrandfromre-annealing.OneDNAstrandwecalledtheleadingstrand,whichformfrom5primeto3primeend,usingDNApolymeraseIII,noproblemhere.Butthelaggingstrandpresentsprob