蛋白质的分离与纯化课件.pptVIP

蛋白質的分離與純化蛋白質的組成與結構蛋白質的基本單位：α-氨基酸非極性側鏈氨基酸（疏水性側鏈氨基酸）非電離極性側鏈氨基酸（親水性側鏈氨基酸）：側鏈不能電離，但側鏈含有-OH、-CO-NH2等極性基團，可與水形成氫鍵；酸性側鏈氨基酸（親水性側鏈氨基酸）：側鏈帶有-COOH，可電離為-COO-而釋放H+；鹼性側鏈氨基酸（親水性側鏈氨基酸）：側鏈帶有-NH2、=NH等鹼性基團，可結合H+而形成-NH3+、=NH2+。氨基酸結構通式蛋白質的分子結構

肽鍵蛋白質分子中的氨基酸之間是通過肽鍵相連的，—個氨基酸的α-羧基與另一個氨基酸的α-氨基脫水縮合，即形成肽鍵肽與多肽鏈圖2-1-2?肽與肽鍵蛋白質分子的結構蛋白質的一級結構指多肽鏈中氨基酸的排列順序一級結構是由遺傳資訊決定的一級結構決定蛋白質的空間結構而蛋白質的空間結構則是實現其生物學功能的基礎蛋白質的二級結構多肽鏈主鏈中各原子在各局部的空間排布，即多肽鏈主鏈構象包括：α-螺旋、β-折疊、β-轉角和不規則捲曲等幾種形式蛋白質分子的結構蛋白質的三級結構每一條多肽鏈內所有原子的空間排布，即多肽鏈的三級結構=主鏈構象+側鏈構象，三級結構是在二級結構的基礎上由側鏈相互作用形成的疏水作用是維繫蛋白質三級結構最主要的動力蛋白質的四級結構有的蛋白質分子由兩條以上具有獨立三級結構的肽鏈通過非共價鍵相連聚合而成，其中每一條肽鏈稱為一個亞基或亞單位(subunit)。各亞基在蛋白質分子內的空間排布及相互接觸稱為蛋白質的四級結構肌紅蛋白三級結構血紅蛋白四級結構蛋白質的結構與功能的關係蛋白質的一級結構與其構象及功能的關係蛋白質一級結構是空間結構的基礎一級結構相似的蛋白質，其基本構象及功能也相似在蛋白質的一級結構中，參與功能活性部位的殘基或處於特定構象關鍵部位的殘基，即使在整個分子中發生一個殘基的異常，那麼該蛋白質的功能也會受到明顯的影響。例如：分子病”的鐮刀狀紅細胞性貧血正常紅細胞鐮刀狀紅細胞蛋白質的結構與功能的關係蛋白質多種多樣的功能與各種蛋白質特定的空間構象密切相關，蛋白質的空間構像是其功能活性的基礎，構象發生變化，其功能活性也隨之改變。蛋白質的理化性質蛋白質的兩性電離：蛋白質兩端的氨基和羧基及側鏈中的某些基團，在一定的溶液ＰＨ條件下可解離成帶負電荷或正電荷的基團（等電點）蛋白質的沉澱：在適當條件下，蛋白質從溶液中析出的現象。a.丙酮沉澱：破壞水化層。也可用乙醇。

b.鹽析：將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，破壞在水溶液中的穩定因素電荷而沉澱。蛋白質變性蛋白質的紫外吸收：由於蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm處有特徵性吸收峰，可用蛋白質定量測定。

蛋白質的分離純化與測定蛋白質的分離純化具有重要的理論和實際意義。許多蛋白質是重要的藥物，研究蛋白質的結構與功能的關係，按照人們的意願去製備一些特殊功能的蛋白質是目前生化制藥的熱點和難題蛋白質的分離提純是一項複雜的工作。因為大多數蛋白質在組織細胞中都是和核酸等生物分子結合在一起的，到目前為止，還沒有一套現成的方法能把任何一種蛋白質從複雜的混合物中提取出來。但是對於任何一種蛋白質都有可能選擇一種較合適的分離純化程式以獲得高純度的製品蛋白質分離純化的一般原則蛋白質提純的總目標是設法增加製品純度或比活性，對純化的要求是以合理的效率、速度、收率和純度，將需要蛋白質從細胞的全部其他成分特別是不想要的雜蛋白中分離出來，同時仍保留有這種多肽的生物學活性和化學完整性。可依據蛋白質不同性質與之相對應的方法將蛋白質混合物分離根據分子大小透析和超濾離心分離置換緩衝液富集亞細胞成分，再對特定的酶進行純化。差速離心，密度梯度離心等凝膠過濾不同的分子量凝膠可用於脫鹽、置換緩衝液根據形狀蛋白質在通過膜、凝膠過濾填料顆粒或電泳凝膠中的小孔運動時，都會受到形狀的影響溶解度影響因素：溶液的pH、離子強度、介電常數和溫度蛋白質在其等電點一般較不易溶解蛋白質的鹽溶和鹽析有機溶劑分級法有機溶劑的濃度不同，蛋白質溶解度不同電荷蛋白質淨電荷取決於氨基酸殘基所帶的正負電荷的總和電泳離子交換層析蛋白質分離純化的步驟細胞的破碎蛋白質的提取蛋白質的純化（一）根據蛋白質溶解度不同的分離方法