基于Keap1_Nrf2_ARE信号通路探讨平胃胶囊对胃黏膜上皮细胞恶变的影响及其机制.docxVIP

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨平胃胶囊对胃黏膜上皮细胞恶变的影响及其机制

王丽娟1,2，汪龙德3*，汪霞1,2，牛小英1,2，樊泽坤1,2，李正菊1,2，牛媛媛1,2，毛兰芳3(1.甘肃中医药大学，兰州730000；2.敦煌医学与转化教育部重点实验室，兰州730000；3.甘肃中医药大学附属医院，兰州730020)

摘要：目的探讨平胃胶囊(Pingweicapsule，PWJN)含药血清对N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG)诱导的人胃黏膜上皮细胞(humangastricmucosalepithelialcells，GES-1)损伤和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路的影响。方法用2×10?5mol·L?1的MNNG处理GES-1细胞，建立MC细胞模型，检测增殖细胞相关抗原(Ki67)及磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)重组蛋白的表达，进行模型评价；细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)筛选PWJN含药血清及Nrf2抑制剂(ML385)最佳干预浓度及时间；将细胞分为6组，正常组、模型组、空白血清组、PWJN组、ML385组、PWJN+ML385组；采用RT-qPCR检测细胞Keap1、Nrf2、醌氧化还原酶(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)的mRNA表达情况，Westernblotting检测细胞Keap1、Nrf2、NQO1、GST的蛋白表达水平，ELISA检测细胞中PTEN浓度，免疫荧光染色法检测细胞中Nrf2和Ki67共表达水平，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯细胞增殖分析法检测PWJN对MC细胞增殖分裂的影响。结果PWJN含药血清最适合作用条件为5.8%干预48h，ML385最适合作用条件为12.5μmol·L?1干预24h。与正常组相比，模型组与空白血清组中Nrf2、NQO1、GSTmRNA及蛋白表达水平、细胞增殖率显著升高(P0.01)，Keap1和PTEN表达水平显著降低(P0.01)；与空白血清组相比，模型组Keap1、Nrf2、NQO1、GSTmRNA及蛋白表达水平，PTEN表达、细胞增殖率差异均无统计学意义；与空白血清组相比，PWJN组中Nrf2、NQO1、GST蛋白及mRNA表达水平、细胞增殖率显著降低(P0.01)，Keap1和PTEN表达水平显著升高(P0.01)；与ML385组相比，PWJN+ML385组中Nrf2、NQO1和GSTmRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)，Keap1和PTEN表达水平显著升高(P0.01)。结论PWJN通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路，降低Nrf2的转录活性及下游过表达因子，从而关闭Nrf2通路，实现正常的氧化-抗氧化平衡可能是治疗胃癌前病变的作用机制之一。

关键词：胃黏膜上皮细胞；平胃胶囊；Keap1/Nrf2/ARE；氧化应激

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-7693(2025)04-0539-10

DOI:10.13748/ki.issn1007-7693引用本文：王丽娟,汪龙德,汪霞,等.基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨平胃胶囊对胃黏膜上皮细胞恶变的影响及其机制[J].中国现代应用药学,2025,42(4):539-548.

EffectofPingweiCapsuleonMalignantTransformationofGastricMucosalEpithelialCellsandItsMechanismBasedonKeap1/Nrf2/ARESignalingPathway

WANGLijuan1,2,WANGLongde3*,WANGXia1,2,NIUXiaoying1,2,FANZekun1,2,LIZhengju1,2,NIUYuanyuan1,2,MAOL