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2025年PCR检测上岗证试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.关于PCR技术的基本原理，以下描述错误的是（）

A.通过变性-退火-延伸三个步骤循环扩增靶核酸

B.扩增产物长度由引物在模板上的结合位置决定

C.TaqDNA聚合酶具有3-5外切酶活性，可校正碱基错配

D.实时荧光PCR通过监测扩增过程中的荧光信号实现定量

答案：C（Taq酶无3-5外切酶活性，无校正功能）

2.进行新冠病毒核酸检测时，若样本采集管中胍盐浓度不足，最可能导致的结果是（）

A.扩增效率降低

B.核酸降解加速

C.引物二聚体增多

D.内参基因无法扩增

答案：B（胍盐是常用核酸保护剂，浓度不足会导致RNA酶未被充分抑制，核酸降解）

3.实时荧光PCR反应体系中，ROX染料的主要作用是（）

A.作为阳性对照的报告基团

B.校正孔间荧光信号差异

C.增强FAM通道的荧光强度

D.指示反应体系的pH值变化

答案：B（ROX为参比染料，用于校正不同孔位的荧光信号误差）

4.引物设计时，若GC含量过高（65%），最可能引发的问题是（）

A.引物与模板结合效率降低

B.非特异性扩增概率增加

C.扩增产物Tm值过低

D.退火温度难以优化

答案：B（GC含量过高易导致引物与非靶序列错配，引发非特异性扩增）

5.以下哪种情况会导致qPCR标准曲线斜率绝对值大于3.6（）

A.反应体系中Mg2+浓度过高

B.模板稀释时存在移液器误差

C.扩增效率超过100%

D.荧光采集时间过早

答案：B（标准曲线斜率绝对值3.6提示扩增效率90%，常见原因为模板稀释不准确或反应抑制）

6.生物安全二级实验室（BSL-2）中，处理新冠病毒核酸提取产物时应（）

A.在生物安全柜内进行操作

B.佩戴N95口罩即可，无需护目镜

C.使用普通医用手套替代丁腈手套

D.实验废弃物直接投入黑色垃圾袋

答案：A（BSL-2实验室处理感染性材料需在生物安全柜内操作）

7.进行PCR实验室分区时，正确的气流方向应为（）

A.试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区（正压递减）

B.产物分析区→扩增区→样本处理区→试剂准备区（负压递增）

C.试剂准备区←样本处理区←扩增区←产物分析区（负压递减）

D.样本处理区→试剂准备区→扩增区→产物分析区（正压递增）

答案：A（PCR实验室需严格分区，气流方向为清洁区→半污染区→污染区，正压递减防止交叉污染）

8.核酸提取过程中，若磁珠法提取的DNAOD260/OD280比值为1.2，最可能的原因是（）

A.洗脱时使用了pH8.0的TE缓冲液

B.蛋白去除不彻底

C.RNA污染严重

D.盐离子残留过多

答案：B（OD260/OD280比值1.8提示蛋白污染，2.0提示RNA污染）

9.检测某样本时，内参基因（GAPDH）Ct值为32，靶基因Ct值为35，且熔解曲线显示靶基因峰型异常，最可能的解释是（）

A.样本中靶基因含量极低

B.引物二聚体干扰

C.热启动酶未激活

D.扩增过程中发生荧光淬灭

答案：A（内参Ct值正常说明提取和扩增体系无显著抑制，靶基因Ct值高于内参且熔解曲线异常可能因靶基因含量极低，接近检测限）

10.以下哪种物质对Taq酶抑制作用最强（）

A.血红蛋白（5mg/mL）

B.尿素（2mmol/L）

C.胆红素（100μmol/L）

D.甘油（5%）

答案：A（血红蛋白中的亚铁血红素是Taq酶强抑制剂，浓度0.5mg/mL即可显著抑制）

11.实时荧光PCR仪校准的关键指标不包括（）

A.温度均匀性

B.荧光通道灵敏度

C.升降温速率

D.仪器重量

答案：D（仪器重量与检测准确性无关）

12.进行室内质量控制时，若连续5次质控样本Ct值呈逐渐上升趋势，应首先排查（）

A.试剂是否临近有效期

B.扩增仪孔间温度差异

C.核酸提取效率是否下降

D.移液器校准状态

答案：C（Ct值逐渐上升提示扩增效率下降，优先排查前处理步骤如提取效率）

13.新冠病毒N基因检测出现阳性，ORF1ab基因阴性，最可能的原因是（）

A.样本中存在PCR抑制物

B.引物探针设计覆盖变异株区域

C.样本采集量不足

D.核酸提取时发生交叉污染

答案：B（新冠病毒变异可能导致特定基因区域突变，使对应引物探针无法结合）

14.处理PCR扩增产物时，正确的操作是（）

A.打开反应管前先离心10秒

B.使用普通离心机代替冷冻离心机

C.在样本处理区进行产物分析

D.扩增产物保存于4℃超过72小时

答案：A（离心可防止开盖时气溶胶扩散）

15.关于数字PCR（dPCR），以下描述正确的是（）

A.依赖C