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2025年pcr上岗证培训试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）

1.PCR技术的全称是：

A.聚合酶链式反应

B.多聚酶链式扩增

C.核酸分子杂交

D.限制性内切酶反应

答案：A

2.引物设计时，GC含量通常建议控制在：

A.10%-20%

B.20%-30%

C.40%-60%

D.70%-80%

答案：C

3.TaqDNA聚合酶的最适催化温度是：

A.55℃

B.72℃

C.95℃

D.60℃

答案：B

4.荧光定量PCR扩增曲线的“指数期”对应：

A.初始模板量的对数与Ct值线性相关的阶段

B.荧光信号接近背景值的阶段

C.酶活性开始下降的阶段

D.产物积累饱和的阶段

答案：A

5.内参基因在定量PCR中的主要作用是：

A.提高扩增效率

B.校正样本加样量差异

C.增强荧光信号

D.降低非特异性扩增

答案：B

6.PCR实验室中最常见的污染类型是：

A.样本间交叉污染

B.环境DNA污染

C.气溶胶污染

D.试剂污染

答案：C

7.TaqMan探针的荧光基团通常标记在：

A.5端

B.3端

C.中间碱基

D.磷酸骨架

答案：A

8.熔点曲线分析（熔解曲线）的主要目的是：

A.确定扩增产物的长度

B.验证扩增产物的特异性

C.计算初始模板浓度

D.检测引物二聚体

答案：B

9.PCR反应中模板变性的温度一般为：

A.55-65℃

B.72℃

C.94-98℃

D.37℃

答案：C

10.绝对定量PCR常用的标准品是：

A.已知浓度的质粒DNA

B.总RNA

C.基因组DNA

D.cDNA

答案：A

11.下列哪种物质会抑制Taq酶活性？

A.EDTA

B.dNTP

C.Mg2+

D.牛血清白蛋白（BSA）

答案：A

12.核酸提取时，加入β-巯基乙醇的主要作用是：

A.裂解细胞

B.抑制RNA酶活性

C.沉淀核酸

D.去除蛋白质

答案：B

13.荧光定量PCR中“阈值”的设定通常基于：

A.基线期荧光信号的标准差

B.指数期荧光信号的最大值

C.平台期荧光信号的平均值

D.阴性对照的荧光值

答案：A

14.进行RNA-PCR时，反转录的关键酶是：

A.TaqDNA聚合酶

B.逆转录酶（RT酶）

C.限制性内切酶

D.DNA连接酶

答案：B

15.PCR实验室“三区”不包括：

A.试剂准备区

B.样本处理区

C.扩增分析区

D.清洁区

答案：D

16.气溶胶污染的主要来源是：

A.离心管未盖紧

B.移液器操作时的吸打

C.样本运输中的泄漏

D.实验室通风不良

答案：B

17.荧光定量PCR结果中“NTC”指的是：

A.阳性对照

B.阴性对照

C.无模板对照

D.内参对照

答案：C

18.扩增产物出现多条非特异性条带时，最可能的原因是：

A.引物浓度过低

B.退火温度过低

C.dNTP浓度不足

D.模板量过少

答案：B

19.进行高通量检测时，防止样本交叉污染的关键措施是：

A.使用带滤芯的吸头

B.增加扩增循环数

C.提高退火温度

D.延长延伸时间

答案：A

20.下列哪项不是实时荧光PCR的优势？

A.无需电泳检测

B.可精确定量

C.检测耗时短

D.能检测未知突变

答案：D

21.核酸提取后OD260/OD280比值为1.6，提示：

A.蛋白质污染

B.盐离子污染

C.RNA污染

D.酚类污染

答案：A

22.实验室发生样本泄漏时，应立即使用的消毒剂是：

A.75%乙醇

B.10%次氯酸钠

C.3%过氧化氢

D.0.5%碘伏

答案：B

23.定量PCR标准曲线的R2值应至少达到：

A.0.85

B.0.90

C.0.95

D.0.98

答案：D

24.进行多重PCR时，引物设计的关键是：

A.所有引物Tm值一致

B.引物长度相同

C.避免引物间互补

D.增加引物浓度

答案：C

25.下列哪种情