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2025年pcr上岗证培训题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.PCR反应中，DNA双链解链（变性）的温度通常设定为？

A.55-60℃

B.72℃

C.94-95℃

D.80-85℃

答案：C

2.引物设计时，避免3端互补的主要目的是？

A.减少引物二聚体形成

B.提高扩增效率

C.降低非特异性扩增

D.增加产物长度

答案：A

3.TaqDNA聚合酶的主要特性是？

A.具有3-5外切酶活性（校正功能）

B.最适反应温度为55℃

C.耐高温（95℃仍保持活性）

D.仅能扩增小于500bp的片段

答案：C

4.荧光定量PCR中，内参基因的主要作用是？

A.监测扩增效率

B.校正样本核酸量差异

C.提高检测灵敏度

D.区分不同靶基因

答案：B

5.PCR实验室最常见的污染来源是？

A.样本间交叉污染

B.扩增产物气溶胶污染

C.试剂污染

D.操作人员皮肤脱落细胞

答案：B

6.荧光定量PCR中，SYBRGreenI的作用原理是？

A.与双链DNA小沟结合发出荧光

B.特异性标记靶基因探针

C.嵌入双链DNA发出荧光

D.标记引物5端

答案：C

7.扩增曲线的“指数期”对应的是PCR反应的哪个阶段？

A.引物与模板结合

B.产物量呈几何级数增长

C.酶活性开始下降

D.产物积累达到平台

答案：B

8.核酸提取时，若样本为全血，常用的抗凝剂是？

A.肝素

B.EDTA-K2

C.枸橼酸钠

D.草酸钠

答案：B（肝素会抑制Taq酶活性）

9.常规PCR结果判读时，阳性对照无扩增条带，可能的原因是？

A.引物浓度过高

B.退火温度过低

C.阳性对照模板失效

D.上样量过多

答案：C

10.荧光定量PCR中，Ct值的定义是？

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物量达到最大值的时间

C.反应体系初始荧光值

D.平台期荧光信号平均值

答案：A

11.PCR反应体系中，dNTP的主要作用是？

A.提供反应缓冲环境

B.作为DNA合成的原料

C.稳定酶活性

D.结合金属离子

答案：B

12.引物Tm值的计算公式（Wallace法）为？

A.Tm=4(G+C)+2(A+T)

B.Tm=2(G+C)+4(A+T)

C.Tm=69.3+0.41(G+C)%-650/L

D.Tm=81.5+0.41(G+C)%-675/L

答案：A（适用于14-20bp引物）

13.实验室进行PCR检测时，阴性对照出现扩增条带，最可能的原因是？

A.样本核酸浓度过高

B.扩增产物污染

C.退火温度过高

D.Taq酶量不足

答案：B

14.荧光定量PCR中，绝对定量与相对定量的主要区别是？

A.是否使用标准品

B.是否需要内参基因

C.检测灵敏度不同

D.扩增效率要求不同

答案：A（绝对定量需标准曲线，相对定量比较样本间差异）

15.核酸提取时，苯酚-氯仿抽提的主要目的是？

A.裂解细胞

B.沉淀核酸

C.去除蛋白质

D.浓缩核酸

答案：C

16.PCR扩增程序中，延伸时间的设定主要依据？

A.引物长度

B.产物长度

C.模板浓度

D.酶的活性

答案：B（通常1kb/分钟）

17.检测RNA病毒时，需先进行的步骤是？

A.反转录（RT）

B.变性

C.退火

D.延伸

答案：A

18.实验室生物安全中，PCR产物属于？

A.非感染性废物

B.化学性废物

C.病理性废物

D.感染性废物

答案：D

19.荧光定量PCR结果中，“无Ct值”通常提示？

A.靶基因高表达

B.反应体系失效或模板缺失

C.扩增效率过高

D.荧光信号过强

答案：B

20.质量控制中，“室内质控”的核心目的是？

A.评价实验室间检测能力

B.监控单次实验的准确性和重复性

C.验证试剂批间差异

D.满足认证要求

答案：B

二、多项选择题（每题3分，共45分）

1.PCR反应体系的基本组成包括？

A.模板DNA

B.引物

C.TaqDNA聚合酶

D.dNTP