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2025年PCR实验室基因扩增检验人员培训试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.实时荧光定量PCR技术中，Ct值的定义是：

A.荧光信号达到设定阈值时的循环次数

B.扩增产物浓度达到最高值的循环次数

C.荧光信号开始出现时的循环次数

D.反应体系温度稳定时的循环次数

答案：A

2.PCR实验室“四区”划分中，产物分析区的主要功能是：

A.样本接收与前处理

B.核酸提取与纯化

C.PCR反应体系配置

D.扩增产物的检测与分析

答案：D

3.以下哪种物质是TaqDNA聚合酶的最适激活剂？

A.Mg2+

B.K+

C.Na+

D.Ca2+

答案：A

4.进行PCR检测时，若阴性对照出现扩增曲线，最可能的原因是：

A.引物设计过长

B.模板浓度过高

C.实验环境污染

D.退火温度过高

答案：C

5.核酸提取过程中，使用75%乙醇洗涤的主要目的是：

A.裂解细胞释放核酸

B.沉淀核酸

C.去除蛋白质和盐离子

D.灭活核酸酶

答案：C

6.实时荧光PCR仪的温度均匀性应控制在：

A.±0.1℃以内

B.±0.5℃以内

C.±1.0℃以内

D.±2.0℃以内

答案：B

7.以下哪种标本保存条件会导致核酸降解风险最高？

A.全血标本4℃保存24小时

B.咽拭子标本-20℃保存1周

C.组织标本常温放置6小时

D.血清标本-80℃保存3个月

答案：C

8.扩增产物污染是PCR实验室最常见的污染类型，其主要来源于：

A.实验人员口腔飞沫

B.实验室空调系统

C.上一轮PCR反应的扩增产物

D.核酸提取试剂污染

答案：C

9.进行新冠病毒核酸检测时，若Ct值为38且扩增曲线呈“S”型，正确的报告结论是：

A.阳性

B.阴性

C.灰区，需重复检测

D.无效结果

答案：C（注：根据2025年最新行业标准，Ct值≥38需结合曲线形态复核）

10.PCR反应体系中，dNTP的最佳浓度范围是：

A.50-100μmol/L

B.100-200μmol/L

C.200-400μmol/L

D.400-800μmol/L

答案：B

11.实验室发生扩增产物污染时，首选的环境消毒方法是：

A.紫外线照射30分钟

B.10%次氯酸钠擦拭

C.75%乙醇喷雾

D.过氧乙酸熏蒸

答案：B（注：次氯酸钠可有效降解DNA/RNA）

12.以下哪种操作会增加气溶胶污染风险？

A.缓慢打开离心管盖

B.使用带滤芯的吸头

C.剧烈震荡反应管

D.在生物安全柜内操作

答案：C

13.评价PCR检测方法灵敏度的指标是：

A.最低检测限（LOD）

B.特异性

C.精密度

D.准确性

答案：A

14.核酸提取过程中，若A260/A280比值小于1.8，提示：

A.核酸浓度过低

B.蛋白质污染

C.多糖污染

D.盐离子残留

答案：B

15.实时荧光PCR仪的校准周期通常为：

A.3个月

B.6个月

C.12个月

D.24个月

答案：C

二、多项选择题（每题3分，共15分，少选、错选均不得分）

1.PCR实验室必须配备的核心设备包括：

A.实时荧光PCR仪

B.高速冷冻离心机

C.生物安全柜

D.核酸提取仪

E.高压蒸汽灭菌器

答案：ABCDE

2.导致PCR假阴性结果的可能原因有：

A.标本采集量不足

B.核酸提取效率低

C.引物与模板不匹配

D.扩增仪温度失控

E.阳性对照无扩增

答案：ABCD

3.核酸提取质量控制的关键步骤包括：

A.样本前处理是否充分

B.裂解液与样本比例是否合适

C.洗涤次数是否符合要求

D.洗脱体积是否准确

E.离心转速与时间是否达标

答案：ABCDE

4.PCR实验室人员防护要求包括：

A.穿专用实验服

B.戴一次性手套（每区更换）

C.佩戴N95口罩

D.操作扩增产物时戴护目镜

E.离开实验室前洗手消毒

答案：ABCDE

5.以下关于标准品使用的描述正确的是：

A.应使用国家认可的标准品

B.不同批号标准品可交叉使用

C.标准品需按说明书保存

D.每次实