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2025年pcr考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.关于PCR技术的基本原理，以下描述错误的是：

A.通过高温变性使双链DNA解旋为单链

B.引物与模板的结合依赖碱基互补配对

C.TaqDNA聚合酶在退火阶段催化dNTP连接

D.延伸阶段的温度通常设定为72℃左右

2.引物设计时，若目标片段GC含量为60%，则引物的Tm值（解链温度）推荐范围最合理的是：

A.45-50℃

B.55-60℃

C.65-70℃

D.75-80℃

3.某PCR反应体系中，模板DNA浓度过高可能导致的结果是：

A.扩增效率显著提升

B.非特异性扩增条带增多

C.引物二聚体完全消失

D.延伸时间明显缩短

4.实时荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用机制是：

A.特异性结合DNA双链的小沟区域

B.与引物5’端的荧光基团发生FRET效应

C.仅与单链DNA结合并发出荧光

D.嵌入DNA双链的碱基对之间发出荧光

5.以下哪种物质不属于常规PCR反应体系的必需成分？

A.dNTP混合物

B.Mg2+离子

C.限制性内切酶

D.引物对

6.若PCR扩增的目标片段长度为1500bp，使用常规Taq酶（延伸速率约1kb/min），则延伸阶段的时间应设置为：

A.30秒

B.1分钟

C.1分30秒

D.2分钟

7.引物二聚体形成的主要原因是：

A.引物与模板非特异性结合

B.引物自身3’端碱基互补配对

C.模板DNA存在二级结构

D.Taq酶浓度过低

8.关于touchdownPCR技术，以下描述正确的是：

A.初始退火温度低于引物Tm值，逐步升高

B.用于扩增GC含量极低的模板

C.可减少非特异性扩增的发生

D.延伸时间需随循环数增加而延长

9.某实验中，PCR产物电泳后出现“smearedband（弥散条带）”，最可能的原因是：

A.引物浓度过低

B.模板DNA严重降解

C.退火温度过高

D.dNTP浓度不足

10.逆转录PCR（RT-PCR）中，若使用Oligo(dT)引物进行反转录，适用于以下哪种模板？

A.原核生物总RNA

B.真核生物mRNA

C.病毒双链RNA

D.细菌rRNA

11.多重PCR技术的关键要求是：

A.所有引物的Tm值差异不超过5℃

B.目标片段长度必须完全一致

C.仅需使用一种荧光染料

D.模板DNA浓度需极低

12.以下哪种方法可用于验证PCR产物的特异性？

A.测定反应体系的OD260/OD280比值

B.进行限制性内切酶酶切分析

C.增加循环数后再次电泳

D.降低退火温度重新扩增

13.在PCR反应中，dNTP的作用是：

A.提供反应所需的能量

B.作为DNA合成的原料

C.稳定Taq酶的构象

D.促进引物与模板结合

14.某实验室使用同一对引物扩增不同样本的DNA，其中一份样本无扩增条带，而阳性对照正常。最可能的原因是：

A.热循环仪温度校准偏差

B.样本DNA中存在PCR抑制剂（如肝素）

C.Taq酶保存不当失活

D.引物稀释时浓度计算错误

15.关于PCR技术的应用，以下描述错误的是：

A.可用于病原体的快速检测

B.无法扩增大于10kb的DNA片段

C.是基因克隆和突变分析的基础工具

D.结合RFLP可进行遗传多态性研究

二、填空题（每空1分，共20分）

1.PCR反应的三个基本步骤依次为________、________、________。

2.TaqDNA聚合酶缺乏________活性，因此扩增产物的3’端通常带有一个________（碱基名称）。

3.实时荧光定量PCR中，Ct值（循环阈值）与模板初始浓度呈________（正/负）相关关系；若某样本的Ct值比阳性对照高3个循环，则其初始模板量约为阳性对照的________（分数）。

4.引物设计时，应避免在3’端出现________（如连续G/C），否则易导致非特异性扩增；同时，引物的GC含量一般建议控制在________之间。

5.为避免PCR污染，实验室需设置________、________、________三个独立区域，分别用于试剂准备、模板处理和扩增产物分析。

6.多重PCR中，若目标片段长度差异较大，电泳时应