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2025年PCR上岗证考试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共20题）

1.PCR反应中，变性步骤的主要目的是：

A.使引物与模板结合

B.断开DNA双链氢键

C.激活TaqDNA聚合酶

D.延伸DNA链

答案：B

2.荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的作用是：

A.特异性结合目标DNA序列

B.非特异性插入DNA双链发出荧光

C.标记引物5’端

D.终止DNA链延伸

答案：B

3.PCR实验室分区管理中，正确的单向流程是：

A.产物分析区→扩增区→样本处理区→试剂准备区

B.试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区

C.样本处理区→试剂准备区→扩增区→产物分析区

D.扩增区→试剂准备区→样本处理区→产物分析区

答案：B

4.以下哪种物质可有效降解PCR产物中的dUTP，防止扩增产物污染？

A.UNG酶（尿嘧啶-N-糖苷酶）

B.限制性内切酶

C.DNA连接酶

D.RNase

答案：A

5.进行PCR反应时，若引物二聚体过多，最可能的原因是：

A.模板浓度过高

B.退火温度过低

C.延伸时间过长

D.Taq酶量不足

答案：B

6.荧光定量PCR仪校准周期通常不超过：

A.3个月

B.6个月

C.12个月

D.24个月

答案：C

7.临床样本核酸提取时，若使用磁珠法，关键步骤是：

A.细胞裂解充分

B.磁珠与核酸结合时保持低温

C.洗脱时加入高浓度盐溶液

D.洗涤时保留磁珠上的杂质

答案：A

8.PCR实验室生物安全等级应为：

A.BSL-1

B.BSL-2

C.BSL-3

D.BSL-4

答案：B

9.以下哪项不属于PCR质量控制中的“室内质控”内容？

A.阴性质控品检测

B.阳性质控品检测

C.标准曲线绘制

D.参加卫生部临检中心室间质评

答案：D

10.若PCR扩增曲线呈“平台期提前”，可能的原因是：

A.模板浓度过低

B.扩增循环数过多

C.引物浓度过高

D.荧光阈值设置过高

答案：C

11.引物设计时，3’端碱基最好选择：

A.A或T

B.G或C

C.任意碱基

D.避免连续G/C

答案：B

12.医疗废物中，使用后的PCR反应管属于：

A.感染性废物

B.化学性废物

C.病理性废物

D.损伤性废物

答案：A

13.实时荧光定量PCR中，绝对定量的实现依赖于：

A.标准曲线法

B.ΔΔCt法

C.熔解曲线分析

D.内参基因校正

答案：A

14.若PCR反应中无扩增产物，且阳性对照正常，最可能的原因是：

A.引物降解

B.模板中存在抑制物

C.扩增仪温度不准确

D.Taq酶失活

答案：B

15.实验室意外泼洒含PCR产物的液体时，应立即：

A.用纸巾擦拭后丢弃

B.用75%乙醇覆盖10分钟后清理

C.用10%次氯酸钠覆盖10分钟后清理

D.直接用清水冲洗

答案：C

16.以下哪种情况会导致Ct值偏大（数值升高）？

A.模板浓度升高

B.引物浓度升高

C.扩增效率降低

D.荧光阈值降低

答案：C

17.PCR反应体系中，dNTP的作用是：

A.提供DNA合成的原料

B.稳定反应体系pH

C.激活Taq酶

D.结合金属离子

答案：A

18.进行核酸提取时，若样本为全血，需优先去除的干扰物质是：

A.血红蛋白

B.白蛋白

C.纤维蛋白原

D.免疫球蛋白

答案：A

19.实验室环境监测中，空气沉降菌检测应在关闭空调及净化系统后，平皿暴露时间为：

A.5分钟

B.15分钟

C.30分钟

D.60分钟

答案：C

20.以下哪项是PCR实验室“三区两缓”中的“两缓”？

A.试剂准备区缓冲间、样本处理区缓冲间

B.样本处理区缓冲间、扩增区缓冲间

C.扩增区缓冲间、产物分析区缓冲间

D.试剂准备区缓冲间、产物分析区缓冲间

答案：A

二、多项选择题（每题3分，共10题）

1.引物设计的基本原则包括：

A.长度18-25个核苷酸

B.GC含量40%-60%

C.3’端避免连续3个G/C

D.避免引物内部形成发夹结构

答