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2025年pcr上岗证培训考试及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.聚合酶链式反应（PCR）的基本反应步骤不包括以下哪项？

A.变性（Denaturation）

B.退火（Annealing）

C.延伸（Extension）

D.连接（Ligation）

答案：D

2.PCR反应中，引物的主要作用是？

A.提供DNA合成的模板

B.激活TaqDNA聚合酶活性

C.为DNA链延伸提供3-OH末端

D.结合dNTP形成磷酸二酯键

答案：C

3.以下哪种物质是PCR反应的常见抑制剂？

A.牛血清白蛋白（BSA）

B.肝素

C.三羟甲基氨基甲烷（Tris）

D.乙二胺四乙酸（EDTA）

答案：B

4.实验室进行PCR检测时，若样本为全血，常用的核酸提取方法是？

A.酚-氯仿抽提法

B.磁珠法

C.煮沸裂解法

D.离心柱法

答案：B

5.PCR扩增仪的温度准确性校准应至少多久进行一次？

A.每月

B.每季度

C.每半年

D.每年

答案：C

6.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是？

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物达到平台期的循环数

C.引物与模板完全结合的时间点

D.反应体系荧光强度最高的循环数

答案：A

7.以下关于PCR实验室分区的描述，错误的是？

A.试剂准备区、样本处理区、扩增区、产物分析区应严格分开

B.各区空气流向应为从低污染区到高污染区

C.样本处理区可同时进行核酸提取和扩增产物检测

D.各区仪器设备及消耗品需专用，不得交叉使用

答案：C

8.进行PCR实验时，防止气溶胶污染的关键措施不包括？

A.使用带滤芯的吸头

B.定期用紫外线照射实验台面

C.在生物安全柜内进行扩增产物开盖操作

D.所有离心管使用前高压灭菌

答案：D

9.临床PCR检测中，阴性对照出现扩增曲线的可能原因是？

A.引物特异性差

B.样本核酸浓度过高

C.Taq酶活性不足

D.反应体系加样量误差

答案：A

10.以下哪种DNA聚合酶具有3→5外切酶活性（校正功能）？

A.TaqDNA聚合酶

B.PfuDNA聚合酶

C.Klenow片段

D.逆转录酶

答案：B

11.PCR反应体系中，dNTP的最佳浓度范围通常为？

A.50-200μmol/L

B.200-500μmol/L

C.500-1000μmol/L

D.1000-2000μmol/L

答案：A

12.进行逆转录PCR（RT-PCR）时，若使用随机引物，主要用于扩增？

A.已知序列的mRNA

B.总RNA中的所有mRNA

C.特定长度的cDNA

D.基因组DNA

答案：B

13.实验室记录应至少保存多久？

A.1年

B.2年

C.5年

D.10年

答案：C

14.以下哪种情况不属于PCR检测的质量失控？

A.阳性对照无扩增

B.阴性对照出现扩增

C.内参基因Ct值在正常范围内

D.重复样本Ct值差异超过3个循环

答案：C

15.处理PCR实验室医疗废弃物时，扩增产物管应先进行？

A.直接放入黄色医疗垃圾袋

B.1mol/LNaOH浸泡30分钟

C.121℃高压蒸汽灭菌30分钟

D.紫外线照射2小时

答案：C

16.引物设计时，GC含量的理想范围是？

A.10%-20%

B.20%-30%

C.40%-60%

D.70%-80%

答案：C

17.qPCR中使用SYBRGreenI荧光染料的缺点是？

A.灵敏度低

B.不能区分非特异性扩增

C.成本过高

D.需特殊仪器

答案：B

18.实验室发生核酸污染时，可采用的清除方法是？

A.用75%乙醇擦拭台面

B.使用DNA酶处理污染区域

C.用蒸馏水冲洗仪器

D.增加样本上样量覆盖污染

答案：B

19.以下哪种样本类型不适合用于PCR检测？

A.新鲜抗凝全血

B.冷冻保存3年的组织块

C.痰液（经前处理液化）

D.已降解的血浆样本（DNA片段＜100bp）

答案：D

20.PCR检测报告的基本内容不包括？

A.患者姓名、性别、年龄

B.检测方法及仪器型号