经鼻递送黄芩苷纳米粒子在缺血性脑损伤中的药理作用及其机制研究.pdfVIP

中文摘要

缺血性脑损伤（Ischemicbraininjury）指因脑血流受限导致的组织损伤，是

近九成中风患者的病因，包括急性脑梗死和慢性脑血管供血不足等情况。这种

情况通常发生在脑血管狭窄与栓塞（如脑梗发作）或全身低灌注状态时，所引

发的糖氧剥夺造成CNS稳态的失衡与细胞死亡。我国脑卒中发病率位列世界之

首，是我国主要的居民致死致残原因之一，为社会与患者家庭带来了沉重的经

济负担。现有的药物溶栓与机械取栓主流策略严重受制于狭窄的给药窗口，只

能使极少数的患者获益，使缺血性脑损伤的长期恢复与患者预后不尽人意。因

此，探索一种新型神经保护剂的分子机制与其给药途径的优化对改善患者生活

质量意义重大。

黄芩苷（Baicalin,BA）是一种来源于唇形科多年生草本植物黄芩

（Scutellariabaicalensis）肉质根茎的一种黄酮类化合物，是黄芩素（Baicalein）

与葡萄糖醛酸形成的糖苷。黄芩苷具有强效的清除自由基活性，其可用于缺血

性脑卒中后期诱发的再灌注损伤。然而在实际给药过程中，由于黄芩苷分子具

有糖基化修饰且溶解度较低，摄取的黄芩苷易被肝脏首过代谢途径大量清除，

其生物利用度较差。此外，由于其在循环中难以穿透血脑屏障（Blood-brain

barrier,BBB），因此缺乏脑靶向直达病灶的能力，使其在临床应用的推广过程

中严重受阻。

鼻-脑（Nose-to-brain,N2B）递送途径是一种可使药物绕过BBB进入中枢神

经系统（Centralnervesystem,CNS）的高速通路，使药物从鼻嗅上皮黏膜处沿

嗅觉神经与三叉神经通路直接进入大脑，是药物的一种非侵入性的安全脑靶向

策略。本研究采用天然高分子材料壳聚糖作为纳米粒子（Nanoparticles,NPs）

囊材，在携载黄芩苷提高其溶解性的同时，采用经鼻给药系统给予黄芩苷纳米

粒子（BANPs），在治疗大鼠大脑中动脉栓塞（Middlecerebralarteryocclusion,

MCAO）模型的同时，探索黄芩苷改善缺血性脑损伤的神经保护作用与新机制。

研究目的：本研究在黄芩苷给药剂型（制备BANPs）与给药途径（鼻脑通路）

优化的药物递送系统下探索黄芩苷缓解缺血性脑损伤梗死体积与神经功能恢复

的潜在分子机制。探索黄芩苷对脑缺血再灌注引发的ROS氧化应激的清除与神

经元稳态的恢复作用，并从Nrf2/HO-1、TLR4/NF-κB、Gpx1和SOD1的损伤相

关分子通路的角度验证黄芩苷的神经保护功能。

实验方法：利用离子交联法制备壳聚糖-黄芩苷纳米颗粒，并对其进行包封率与

形态学的表征，测定黄芩苷的体外释放速率；采用糖氧剥夺（Oxygenand

glucosedeprivation,OGD）体外模型，MTT法测定BANPs给药后的细胞活力，

进行ROS检测，ELISA测定炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）水平；体内实验

利用线栓法制备大鼠MCAO模型，并用TTC法计算脑梗死面积；在优化治疗

剂量下，比较口服黄芩苷纳米粒子、经鼻给予黄芩苷纳米粒子和阳性药组（脑

心通胶囊）的治疗效果（MTT、神经功能学评价、TUNEL染色、TTC染色、

HE染色和免疫组织化学染色），并通过RT-qPCR与WesternBlot对TLR4、NF-

κB、Nrf2、HO-1、Gpx1以及SOD1的mRNA与蛋白的表达量进行测定。

实验结果：

（1）黄芩苷纳米粒子制备及表征：制备的壳聚糖纳米粒子具有良好的球形

结构和稳定性，在200μg/mL下黄芩苷纳米粒子仍保持较好的分散性，未出现

明显的粒子聚集，所制备的黄芩苷纳米粒子表现出较好的形态和稳定性，适合

作为药物递送的载体，具备进一步进行药理研究和应用的潜力。

（2）体外药效学观察：利用氧糖剥夺（OGD）建立缺血性脑损伤细胞模

型，通过考察黄芩苷纳米粒子（BANPs）的体外药效学进行评价。结果表明，

BANPs在不同浓度下对缺血性脑损伤细胞的存活率有显著提升。与阳性对照药

物（脑心通胶囊）相比，BANPs在100μg/mL和200μg/mL浓度下均能够显著

减少细胞凋亡，抑制活性氧（ROS）的产生，并降低促炎性细胞因子的表达。

黄芩苷纳米粒子不仅能够抑制缺血性脑损伤相关的炎症反应，还能通过