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检验技术人员PCR上岗证培训试题(附答案及解析)

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.以下关于PCR技术的描述，错误的是：

A.全称是聚合酶链式反应

B.依赖DNA聚合酶的耐高温特性

C.扩增对象只能是DNA模板

D.基本步骤包括变性、退火、延伸

答案：C

解析：PCR扩增对象可以是DNA或RNA（需先反转录为cDNA），因此C错误。其他选项均正确，Taq酶的耐高温特性是PCR的核心，基本步骤为三温度循环。

2.TaqDNA聚合酶的最适反应温度是：

A.55℃

B.72℃

C.95℃

D.60℃

答案：B

解析：Taq酶的最适延伸温度为72℃，此时酶活性最高，可高效催化脱氧核苷酸连接到引物3’端。

3.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是：

A.荧光信号达到仪器本底噪音时的循环数

B.荧光信号进入指数增长期的起始循环数

C.荧光信号达到设定阈值时的循环数

D.荧光信号进入平台期的循环数

答案：C

解析：Ct（CycleThreshold）值是荧光信号达到设定阈值（通常为基线期荧光背景标准差的10倍）时所对应的循环数，是qPCR定量的核心参数。

4.PCR实验室分区中，“扩增产物分析区”的主要操作是：

A.样本核酸提取

B.PCR反应体系配制

C.扩增后产物检测

D.引物和探针的分装

答案：C

解析：PCR实验室需严格分区，扩增产物分析区专门用于检测扩增后的产物（如电泳、荧光读取等），避免产物污染前区。

5.引物设计时，以下哪项不符合原则？

A.长度18-25个核苷酸

B.GC含量40%-60%

C.3’端与模板互补碱基≥3个

D.引物自身形成≥3个碱基的发夹结构

答案：D

解析：引物自身若形成发夹结构（茎环结构），会导致引物内部退火，影响与模板的结合，因此需避免。其他选项均为引物设计的基本原则。

6.以下哪种物质会抑制Taq酶活性？

A.二甲基亚砜（DMSO）

B.乙二胺四乙酸（EDTA）

C.牛血清白蛋白（BSA）

D.氯化镁（MgCl?）

答案：B

解析：EDTA是金属离子螯合剂，会结合Mg2?（Taq酶的激活剂），从而抑制酶活性。DMSO可提高扩增特异性，BSA可减少酶的非特异性吸附，MgCl?是酶的激活剂。

7.核酸提取过程中，加入蛋白酶K的主要目的是：

A.裂解细胞膜

B.降解RNA

C.消化蛋白质杂质

D.沉淀核酸

答案：C

解析：蛋白酶K可水解样本中的蛋白质（如核蛋白、杂质蛋白），使核酸游离释放，提高提取纯度。

8.qPCR中使用SYBRGreenI染料法时，特异性主要依赖于：

A.染料与双链DNA的结合能力

B.引物的特异性

C.探针的特异性

D.扩增产物的长度

答案：B

解析：SYBRGreenI能结合所有双链DNA，因此特异性完全依赖引物的设计（避免非特异性扩增）；探针法（如TaqMan）的特异性由探针和引物共同保证。

9.PCR反应体系中，dNTP的作用是：

A.提供反应所需能量

B.作为DNA合成的原料

C.稳定酶的构象

D.调节反应pH

答案：B

解析：dNTP（脱氧核苷酸三磷酸）是DNA链延伸的原料，在Taq酶作用下，其α-磷酸基团与引物3’端羟基形成磷酸二酯键。

10.以下哪种情况会导致PCR产物出现非特异性条带？

A.退火温度过低

B.模板浓度过低

C.Mg2?浓度过低

D.引物浓度过低

答案：A

解析：退火温度过低时，引物可能与模板非特异性结合（错配），导致扩增出非目标片段；模板浓度过低可能无扩增或条带弱，Mg2?过低会抑制酶活性，引物浓度过低可能导致扩增效率下降。

11.生物安全柜使用时，正确的操作是：

A.实验结束后立即关闭风机

B.操作区存放大量试剂和耗材

C.手臂快速进出操作区

D.操作前用75%乙醇擦拭台面

答案：D

解析：生物安全柜操作前需用75%乙醇消毒台面，避免交叉污染；实验结束后应继续运行10-15分钟以净化空气，操作区应尽量少放物品，手臂需缓慢移动以维持气流稳定。

12.以下关于PCR污染的描述，错误的是：

A.气溶胶污染是最常见的污染类型

B.阳性对照污染属于外源性污染

C.样本间交叉污染属于内源性污染

D.扩增产物污染属于外源性污染

答案：C

解析：样本间交叉污染（如加样时移液器带样）属于外源性污染；内源性污染指样本自身的抑制物或降解核酸