脑膜炎奈瑟菌实验室检测操作规范详解知识.pdfVIP

附件7脑膜炎奈瑟菌实验室检测操作规范

一、脑膜炎奈瑟菌鉴定程序和标准

1、脑膜炎奈瑟菌细菌鉴定程序

脑膜炎奈瑟菌的鉴定通常是通过在CAP和BAP上生长物通过革兰染色

镜检和生化反应检以确定是否为脑膜炎奈瑟菌，在此基础上再通过脑膜炎奈瑟

菌分群诊断血清进行It清分群。

2、脑膜炎奈瑟菌感染确诊实验室检

疑似流脑病例具有以下实验室检结果之一，即可确诊：

L培养：自脑脊液或血液标本中分离到脑膜炎奈瑟菌。

2.乳胶凝集检：采用乳胶凝集检试剂盒，脑脊液标本乳胶凝集检结果

阳性,目前Bio-Rad乳胶凝集检试剂盒能检A群、B群、C群和W135/Y群

脑膜炎奈瑟菌感染。

3.PCR检：脑脊液标本或血液标本PCR扩增特异性脑膜炎奈瑟菌DNA

片段阳性。通过c/M基因扩增，鉴定脑膜炎奈瑟菌，通过扩增。于2、siaD(B)、

siaD(C)、sMD(Y)、sMD(W135)等基因片段鉴别不同的血清群，或通过Real-time

PCR检出特异性基因片段阳性。

4.血清IgG抗体滴度4倍增高：恢复期血清抗体滴度较急性期4倍增高。

二、脑膜炎奈瑟菌标本接种培养

（-）脑脊液标本

1.脑脊液标本预处理

脑脊液标本送到实验室后，应立即离心，2rpm,2min,用巴斯德吸管

吸取上清，进行乳胶凝集实验检抗原。离心后的沉淀进行剧烈振荡或充分混合。

取1滴沉淀准备革兰染色，1滴划线接种原始培养基。注（意:如果获得的脑脊液

不足1mL则不进行离心，直接用其进行革兰染色和涂板培养）。

2.脑脊液标本初代培养脑膜炎奈瑟菌的初代接种培养基为巧克力琼指平

板。将离心后的脑脊液标本沉淀滴加至巧克力琼脂平板，取菌环划线接种，置

5%的CO?孵箱或燃有蜡烛的烛缸中培养。也可将一些沉淀接种备用肉汤培养基

（如脑心浸液肉汤培养基），进行孵育培养。如果用T-I培养基进行运输，在孵

育24h后，用无菌的针或注射器转移lOOplT-I培养基的液体部分到RAP及CAP

上，并划线分离。

3.脑脊液标本革兰染色H（ucker改进方法）

脑脊液标本离心沉淀物革兰染色或采用乳胶凝集方法检CSF中特殊的抗

原成分两种检方法，可作为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌引起的

细菌性脑膜炎的初步诊断。即使标本培养阴性，革兰染色或乳胶凝集检结果阳

性或其中任何一个检结果阳性即可以作为感染的证据。

（1）脑脊液标本离心，2rpm,2mino

2（）酒精清洗并干燥的玻片，滴加1滴〜2滴沉淀物，允许多滴汇集成一

个大滴，不要铺开液体或使用过高浓度的沉淀物。可能的情况下，在生物安全柜

中风干玻片。

3（）将玻片三次快速通过火焰以固定涂片，不应该灼干。也可以使用异丙

醇9（5%-l（X）%）固定。

4（）草酸镂结晶紫染色玻片，Imin。流水冲玻片Imin,并去除多余的水

分。

5（）革兰氏碘液染色玻片，Imin。流水冲玻片并干燥。

（6）95%的乙醇脱色5（s・1s足够）。

7（）番红精复染2s-3s或用酚红复染1s-15s。流水冲玻片并拭干扳片。

显微镜观察染色的涂片，用亮视野的透镜和油镜。

脑膜炎奈瑟菌通常出现在多形核白细胞内或细胞外，革兰阴性、咖啡豆形双

球菌。