酶催化反应课件.pptVIP

酶催化反應酶是具有高度選擇性的催化劑，而一般情況下的酶反應均是在溫和條件下進行的（如常溫、常壓和中性溶液），酶的這些特性使酶能在食品、飲料和診斷工業中廣泛應用。同樣這些特性使酶能在各種化合物的合成，尤其是在藥物、手性中間體、特殊的聚合物和生化物質合成中顯示出了潛在的吸引力。9.1酶催化反應9.1.1酶和細胞的固定化方法固定化酶：通過物理或化學的方法將溶液酶轉變為在一定的空間內其運動受到完全或局部約束的一種不溶於水，但仍具活性的酶。它能以固相狀態作用於底物進行催化反應。固定化細胞：將完整的細胞限定在一定空間內活動的一種固定化生物催化劑。注意：由於是具有催化活性的蛋白質的固定化，所以必須嚴格操作條件，盡可能避免酶的高級結構受到損害。9.1.1酶和細胞的固定化方法★常用方法：吸附法、包埋法、交聯法、化學共價法、逆膠束包囊法等★常用載體：活性炭、多孔玻璃、纖維素、交聯葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯醯胺凝膠、海藻酸鹽、明膠、合成的高分子化合物等1）吸附法（最古老、最簡便經濟）特點：●蛋白質與載體之間的結合力很弱●在很多情況下，酶的非特異性吸附常會引起部分或全部失活，且高濃度的鹽溶液或底物溶液又將加速蛋白質的脫附。吸附劑的種類（1）：◆各種礦物質和其他無機載體：高嶺土、多孔玻璃、氧化鋁、二氧化矽等蛋白質結合量通常很低◆纖維素粉：糖苷水解酶在纖維素上有較強的吸附◆離子交換劑（目前最常用）：羧甲基纖維素、DEAE-纖維素、DEAE-葡聚糖以及合成的離子交換劑等作用原理：靜電吸引缺點：當離子強度增加或者介質的pH、溫度改變時，這種結合發生分解。第一個用於工業生產的固定化酶：固定化氨基醯化酶——將氨基醯化酶吸附在DEAE-纖維素或DEAE-葡聚糖上制得。吸附劑的種類（2）：吸附劑的種類（3）：◆蛋白質載體：膠原蛋白是最常用的一般膠原蛋白載體預先製成膜狀（膠原膜），膠原膜溶脹，然後浸入酶溶液，酶滲入膜內並被吸附，製成酶膜。◆生物特異性吸附劑：如，伴刀豆球蛋白A-瓊脂糖，可有效地固定一些以糖蛋白為結構的酶。2）包埋法（普適性）包埋法：將酶包裹於凝膠格子或聚合物半透膜微膠囊中的方法特點：●酶分子本身不直接參加反應●條件較溫和●酶活力回收較高●對底物分子和產物分子的大小有限制載體（1）：格子型包埋法載體常用的：海藻酸鹽、K-角叉菜、瓊脂、三醋酸纖維素和聚丙烯醯胺凝膠等★海藻酸鹽：價格便宜、來源豐富，無毒性，目前應用較廣特點：△操作簡便、條件溫和△在高濃度的電介質（K+、Na+等）溶液中，固定化顆粒會不穩定；△Ca2+等多價離子在磷酸緩衝液中會沉澱，固定化顆粒的機械強度將降低，最後重新溶解。因此用此法包埋的固定化酶或細胞不能用於磷酸緩衝溶液中。一般操作方法：先將海藻酸鹽溶於水中，使其具有一定粘度；然後加入一定量的細胞菌體，並且充分攪拌，使之分散均勻；通過注射器或毛細管將此菌體懸浮液逐滴注入含有Ca2+、Zn2+、Al3+等多價離子的溶液中，由於離子轉移的膠凝作用，海藻酸鹽液滴便形成珠狀的固定化細胞顆粒。待顆粒經過一定時間的硬化後洗淨，即可用於催化反應。★聚丙烯醯胺凝膠：蛋白質的固定量較高，可達10~100mg/g單體，目前常用的聚合物載體特點：△聚丙烯醯胺凝膠中孔的大小分佈很不均勻，因此要防止酶的漏失。△調節單體和交聯劑的用量可以改善聚丙烯醯胺凝膠的滲透性。操作方法：在含酶（或細胞）的水溶液中，加入一定比例的單體丙烯醯胺和交聯劑N，N’-甲撐雙丙烯醯胺；然後在催化劑（二甲氨基丙腈）和引發劑（過硫酸鉀）的作用下低溫（水浴）聚合；產生的聚合物凝膠便是固定化酶，可通過機械方法分散成一定大小的粒子。載體（2）：微膠囊包埋材料常用的：火棉、尼龍、聚脲等半滲透的介面聚合物膜如，將含有1,6-二氨基己烷的酶水溶液分散到與水互不相溶的含有己二醯二氯的有機溶劑中去，水相與有機相介面上的二胺和二醯氯發生聚合，形成一個包圍在水相酶溶液珠滴外面的聚醯胺薄膜（即尼龍-6,6-薄膜）。3）交聯法★交聯法：利用雙功能基團試劑或多功能基團試劑使酶發生分子間交聯因而得到固定的方法。★常用的試劑：戊二醛、1,6-亞己基二異氰酸酯、雙重氮聯苯胺和乙烯-馬來酸酐共聚物等。★雙功能基團試劑與酶蛋白的交聯作用，常引起蛋白質高級結構的改變，使酶失活。★常在被交聯的酶蛋白溶液中添加一定量的輔助蛋白，避免或減少酶在交聯過程中因化學修飾造成的失活。如牛血清蛋白和明膠等蛋白的加入往往能提高固