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《基因工程原理与应用》期末考试及答案

一、选择题（每题2分，共20分）

1.下列关于II型限制性内切酶的描述，错误的是：

A.识别序列多为回文结构

B.切割位点通常在识别序列内部

C.需ATP提供能量

D.产生黏性末端或平末端

答案：C

2.作为基因工程载体，质粒必须具备的基本特征不包括：

A.自主复制能力

B.多个单一酶切位点

C.抗生素抗性基因

D.大于10kb的分子量

答案：D

3.PCR反应体系中不包含的成分是：

A.dNTPs

B.TaqDNA聚合酶

C.模板RNA

D.特异性引物

答案：C

4.构建cDNA文库时，关键步骤是：

A.提取基因组DNA

B.反转录合成cDNA

C.用限制性酶切割染色体DNA

D.插入YAC载体

答案：B

5.T4DNA连接酶的主要作用是：

A.连接DNA单链缺口

B.连接RNA与DNA链

C.降解RNA引物

D.合成DNA子链

答案：A

6.CRISPR-Cas9系统中，sgRNA的功能是：

A.编码Cas9蛋白

B.识别靶DNA序列

C.切割DNA双链

D.激活转录过程

答案：B

7.基因敲除技术常用的方法是：

A.随机整合

B.同源重组

C.转座子插入

D.病毒感染

答案：B

8.与基因组文库相比，cDNA文库的特点是：

A.包含非编码区序列

B.仅含表达基因的编码序列

C.包含内含子

D.需用限制性酶切割基因组DNA

答案：B

9.Southern杂交检测的对象是：

A.蛋白质

B.RNA

C.基因组DNA

D.多糖

答案：C

10.根癌农杆菌Ti质粒的关键功能区域是：

A.复制起始区

B.T-DNA区

C.毒性蛋白编码区

D.抗生素抗性区

答案：B

二、填空题（每空1分，共20分）

1.限制性内切酶EcoRI的命名中，Eco代表（大肠杆菌），R代表（菌株RY13），I代表（酶的编号）。

2.基因工程载体需具备的三个基本要素是（自主复制序列）、（多克隆位点）和（选择标记基因）。

3.PCR反应的三个基本步骤是（变性）、（退火）和（延伸）。

4.cDNA合成过程中，关键酶是（反转录酶）和（DNA聚合酶I）。

5.目前常用的基因编辑工具除CRISPR-Cas9外，还有（TALENs）和（ZFNs）。

6.原核表达系统中最常用的宿主菌是（大肠杆菌），其缺点是无法进行（蛋白质糖基化修饰）。

7.第二代DNA测序技术的主流代表是（Illumina边合成边测序），其核心原理是（桥式PCR扩增结合荧光标记dNTP）。

8.Southern杂交的主要步骤包括（DNA提取与酶切）、（凝胶电泳分离）、（转膜固定）、（探针杂交）和（检测显影）。

9.Ti质粒介导的植物转基因中，T-DNA区域会整合到（植物染色体DNA）中。

10.基因治疗按受体细胞类型分为（体细胞治疗）和（生殖细胞治疗），目前临床主要开展（体细胞治疗）。

三、名词解释（每题4分，共20分）

1.限制性核酸内切酶：一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列（多为4-8bp回文结构），并在识别位点或附近切割磷酸二酯键的内切酶，是基因工程的分子剪刀，主要分为I、II、III型，其中II型最常用。

2.载体：能携带外源DNA片段进入宿主细胞并进行复制/表达的DNA分子，需具备自主复制能力、多克隆位点和选择标记，常见类型有质粒、噬菌体、病毒载体和人工染色体（如YAC、BAC）。

3.PCR（聚合酶链式反应）：通过模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增目标DNA片段的技术。利用耐高温的TaqDNA聚合酶，经过变性（双链解旋）、退火（引物结合模板）、延伸（合成新链）三步循环，使目标片段呈指数级扩增。

4.cDNA文库：以特定组织或细胞的mRNA为模板，通过反转录合成cDNA，与载体连接后转化宿主细胞形成的克隆集合。仅包含表达基因的编码序列（无内含子），反映该组织细胞的基因表达谱。

5.CRISPR-Cas9：一种基于细菌获得性免疫系统改造的基因编辑技术。由sgRNA（引导RNA）靶向特定DNA序列，Cas9蛋白切割DNA双链形成DSB（双链断裂），通过NHEJ（非同源末端连接）或HR（同源重组）实现基因敲除、插入或定点突变，具有高效、特异、操作简便的优势。

四、简答题（每题6分，共30分）

1.简述II型限制性内切酶的特点及在基因工程中的应用。

特点：①识别序列多为4-8bp回文结构；②切割位点在识别序列内部或附近；③无需ATP，仅需Mg2+；④产生黏性末端（如EcoRI切出5突出端）或平末端（如SmaI）。

应用：①切割载体与目的基因，产生互补末端便于连接；②构建物理图谱（酶切位点定位）；③检测基因突变（RFL