植物脱毒技术原理与应用.pdfVIP

脱毒技术

1、脱毒原理

1.1热处理脱毒

原理：植物组织处于高于正常温度环境时，组织内部的病毒受热后

钝化，其复制功能受到影响，以致病毒含量不断降低，甚至死亡，从而

达到脱毒的目的。

热处理对葡萄扇叶病毒、苹果花叶病毒、康乃馨病毒等一类的圆形

或线形的病毒起作用。如：葡萄扇叶病毒在38℃处理30分钟可脱除。

1889年，用热水浸甘蔗种，得到病毒减轻的甘蔗。

英国的卡尼斯（1950）：马铃薯块茎37℃处理20天，卷叶病毒消失。

1.1热处理脱毒

局限性：

并非所有的病毒都对热处理敏感，热处理只对等径的、线状的病

毒和类菌质体起作用。

延长处理时间，病毒钝化效果好，同时也钝化植物组织中的抗性

因子而降低处理效果。

热处理后只有部分植物能够存活。

1.2茎尖培养脱毒

原理：病毒在植物体内分布不均，越接近生长点，病毒浓度越

稀微茎尖不含植物病毒。

Holling对康乃馨斑驳病毒的研究：切取康乃馨不同大小的芽，

将其汁液稀释至500倍，然后接种到被检植物茎尖（敏感植物）上，

只有微茎尖不能使指示植物染病毒。

1.2茎尖培养脱毒

病毒数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的

感染浓度越低，生长点(约0.1～1.0mm区域)则几乎不含或含病毒

很少。

分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细

胞不断分裂和活跃的生长速度。

1.2茎尖培养脱毒

技术关键：

同一种病毒在不同植物体内分布部位

不同；不同病毒种类在同一种植物中分

布部位不同；培养不同大小茎尖，所脱

除的病毒种类不同。

利用茎尖脱除植物病毒时，须确定病

毒在植物茎尖分布位置，然后正确培养

茎尖的大小。

1.2茎尖培养脱毒

1：外植体来源

2：初始培养的分生组织的外植体

3：外植体生长

4：腋生枝增殖

5a：移植

5b：块茎形成

试管薯培养脱毒

1.2茎尖培养脱毒

1.2茎尖培养脱毒

草莓花药/茎尖培养

1.3愈伤组织脱毒原理

从器官或组织诱导愈伤组织，分化不定芽，生根培养成植株，

可获脱毒苗。如马铃薯、大蒜、草莓、水仙、香蕉等

1.3愈伤组织脱毒原理

原理及依据：

病毒在植物体内的不同器官或组织分布不均匀，甚至在同一感

病的组织内，存在不感病毒的细胞群落。这些无病毒细胞在愈伤

组织的增殖中获得无病毒组织。

病毒复制能力的衰退或丢失。有些愈伤组织细胞病毒的浓度低，

病毒颗粒在愈伤组织的增殖过程中逐渐降低。

继代培养的愈伤组织产生抗性变异。

技术关键：诱导可再生出植株的愈伤组织。

2、脱毒方法

（1）热处理脱毒

温水浸渍处理：

适用于休眠器官，在50℃左右的温水中浸渍10min至

数小时，简便易行，但材料易受伤。

热空气处理：

将材料放在高温生长室（在35—40℃），使其顶端分

生组织比次生分生组织生长迅速，切取其茎尖分生组织

进行离体培养。处理时间因植物而异，短则几十分钟，

长可达数月。

应用：

1、柑橘黄龙病

50℃，50min蒸气或37℃，3周

2、柑橘衰退病

40/30变温，7~12周

3、柑橘碎叶病

40/30变温，8周

（2）组织培养脱毒

微茎尖培养脱毒

愈伤组织培养脱毒

珠心组织培养脱毒

微茎尖培养脱毒

愈伤组织培养脱毒

珠心组织培养脱毒

（3）微体嫁接离体培养脱毒

微体嫁接法是20世纪70年代发展的一种培养无病毒苗的方法，也

称试管嫁接。

可把极小（小于0.2mm）茎尖，作为接穗嫁接到生长在试管中

的实生砧木上（种子获无菌苗，实生苗不带毒）。

接穗在砧木的饲喂下很容易成活。接穗是很小的茎尖，带毒概率

小，可获无毒苗。

已在柑橘、苹果上获得成功。

（3）微体嫁接离体培养脱毒

技术关键：

剥离技术高：嫁接的成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与接

穗大小呈负相关。

茎尖大小：茎尖越小脱毒效果越好，小于0.2mm的茎尖嫁接可脱

除多数病毒。

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