DB33-T 743-2009 水产品中腹泻性贝类毒素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.docxVIP

DB33T7432009水产品中腹泻性贝类毒素残留量的测定液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了水产品中腹泻性贝类毒素残留量的液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于鱼类、贝类、甲壳类等水产品中腹泻性贝类毒素（包括大田软海绵酸、鳍藻毒素1、鳍藻毒素2、鳍藻毒素3）残留量的测定。

本标准的方法检出限：大田软海绵酸为10μg/kg，鳍藻毒素1为20μg/kg，鳍藻毒素2为20μg/kg，鳍藻毒素3为20μg/kg。

2规范性引用文件

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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则

3原理

试样中的腹泻性贝类毒素经甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。通过色谱柱分离，采用电喷雾离子源（ESI）负离子模式，多反应监测（MRM）模式进行检测，根据保留时间和离子丰度比进行定性，以峰面积进行定量。

4试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇：色谱纯。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3甲酸：色谱纯。

4.4乙酸铵：色谱纯。

4.5氨水：分析纯。

4.60.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL，用水定容至1000mL。

4.7甲醇水溶液（80+20，V/V）：取甲醇800mL，加水200mL，混匀。

4.8氨水甲醇溶液（5+95，V/V）：取氨水5mL，用甲醇定容至100mL。

4.9标准品：大田软海绵酸（OA）、鳍藻毒素1（DTX1）、鳍藻毒素2（DTX2）、鳍藻毒素3（DTX3）纯度≥95%。

4.10标准储备溶液：分别准确称取适量大田软海绵酸、鳍藻毒素1、鳍藻毒素2、鳍藻毒素3标准品，用甲醇溶解并定容，配制成100μg/mL的标准储备溶液，18℃避光保存。

4.11混合标准中间溶液：准确吸取各标准储备溶液1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成10μg/mL的混合标准中间溶液，4℃避光保存。

4.13固相萃取柱：HLB固相萃取柱（200mg，6mL）或相当者。

4.14微孔滤膜：0.22μm，有机相。

5仪器和设备

5.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01mg。

5.3组织匀浆机：转速不低于10000r/min。

5.4离心机：转速不低于4000r/min。

5.5涡旋混合器。

5.6氮吹仪。

5.7固相萃取装置。

5.8超声波清洗器。

5.9pH计：精度±0.02。

5.10移液器：10100μL，1001000μLL。

5.11容量瓶：10mL，25mL，50mL，100mL。

5.12具塞离心管：50mL。

6试样制备与保存

6.1试样制备

取具有代表性的水产品样品，去除不可食部分，取可食部分约500g，用组织匀浆机匀浆，装入洁净容器中，密封备用。

6.2试样保存

7分析步骤

7.1提取

称取匀浆试样5.0g（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加入20mL甲醇水溶液（80+20，V/V），涡旋混合2min，超声提取15min，以4000r/min离心5min。将上清液转移至另一50mL离心管中，残渣再加入20mL甲醇水溶液（80+20，V/V），重复提取一次，合并上清液。

7.2净化

7.2.1固相萃取柱活化：依次用5mL甲醇、5mL水活化HLB固相萃取柱，保持柱体湿润。

7.2.2上样：将提取液以12mL/min的流速通过固相萃取柱。

7.2.3淋洗：用5mL水淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液。

7.2.4洗脱：用5mL氨水甲醇溶液（5+95，V/V）洗脱，收集洗脱液于10mL离心管中。

7.2.5浓缩：将洗脱液在40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL甲醇水溶液（80+20，V/V）溶解残渣，涡旋混合1min，经0.22μm微孔滤膜过滤，供液相色谱串联质谱测定。

7.3测定

a)色谱柱：C18柱（2.1mm×100mm，1.7μm）或相当者；

b)流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈；

c)梯度洗脱程序：0min20%B，05min20%90%B，58min90%B，88.1min90%20%B，8.112min20%B；

d)流速：0.3mL/min；

e)柱温：40℃；

f)进样量：5μL。

a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b)扫描方式：负离子模式；

c)检测方式：多反应监测（MRM）；

d)毛细管电压：3.0kV；

e)