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微生物学Microbiology岳阳职业技术学院单元二原核微生物晏琼宇主讲
微生物学Microbiology岳阳职业技术学院实验二革兰氏染色法晏琼宇主讲
一、实验目的学习微生物制片、染色的基本技术掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理细菌鉴定的重要方法，可将全部细菌分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。G+菌∶细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。G-菌∶肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。
二、实验原理
三、实验仪器与用具超净工作台、接种环、酒精灯、火柴、试管架、显微镜、擦镜纸、双层瓶、装有蒸馏水的滴瓶等
四、实验材料与试剂大肠杆菌24h牛肉膏琼脂斜面培养物枯草芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨营养琼脂斜面培养物金黄色葡萄球菌16h牛肉膏蛋白腺营养琼脂斜面培养物革兰氏染色液（草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液等）
五、实验步骤
六、实验结果
七、注意事项选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，，脱色过度造成假阴性。
课程思政伟大的无产阶级革命家卡尔.马克思说∶在科学的道路上没有平坦的大道可走，只有不畏艰险沿着崎岖陡峭山路攀登的人，才有希望到达光辉的顶点，希望同学养成举一反三、循序渐进的求知精神，提早谋划自己未来的职业发展道路。
八、思考题讲述革兰氏染色的原理，并指出E.C和B.S分别属于革兰氏阳性或阴性?做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚?革兰氏染色成败的关键一步是什么?
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