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单克隆抗体的制备

目录

◆基本概念

◆杂交瘤技术的诞生及发展

◆杂交瘤技术的原理

◆杂交瘤技术的基本程序

◆单克隆抗体的生产

一、基本概念

⚫单克隆抗体（monoclonalantibody）

简称单抗，是由一个B细胞克隆针对单一抗原决定簇产生

的抗体。

⚫多克隆抗体（polyclonalantibody）

简称多抗，是针对多个不同抗原决定簇的抗体的混合物。

⚫杂交瘤细胞系（thehybridomacellline）

既能像骨髓瘤细胞一样在体外培养中无限制增殖，又能像

脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体，通过克隆化得到

来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系。

二、杂交瘤技术的诞生及发展

◆杂交瘤技术的诞生

1975年8月7日，Koher和Mistein在英国《自然》杂志上发表了题

为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续性培养”的著名论文，

通过骨髓瘤细胞与免疫绵羊红细胞的小鼠脾细胞融合，最终获得了很

多能分泌抗绵羊红细胞抗体的克隆化杂交瘤细胞系。

◆发展

融合剂：聚乙二醇（PEG）

建立的骨髓瘤细胞系：SP2/0-Ag14，X63-G8653，NSO/1等，后

来又建立了大鼠、人和鸡等的骨髓瘤细胞系。

三、杂交瘤技术的原理

选择性培养基

HAT

融合后形成的细胞种类

细胞种类选择性培养基HGPRT细胞生长状态

脾细胞+骨髓瘤细胞+长期生长

脾细胞+脾细胞+短期生长

骨髓瘤细胞+骨髓瘤细胞HAT-不能生长

脾细胞+短期生长

骨髓瘤细胞-不能生长

SP2/0细胞是缺陷性细胞，无HGRPT

细胞中核苷酸主要合成途径细胞中核苷酸补救合成途径

氨基碟呤（A）

次黄嘌呤（H）

HAT

HGRPT

胸腺嘧啶核苷（T）

核苷酸

次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶

DNA

四、杂交瘤技术的基本程序

基本步骤

⚫动物免疫、

⚫细胞融合、

⚫杂交瘤细胞的筛选与检测

⚫杂交瘤细胞的克隆化

⚫细胞的冻存

⚫单抗的鉴定等。

1.动物免疫

抗原制备纯度、量

动