实验一土壤脲酶活性测定一.PPTVIP

实验一土壤脲酶活性测定

一、实验目的

1.掌握土壤脲酶活性测定第一种方法，

了解所取土壤的脲酶活性。

2.了解尿素这一有机物在土壤环境中的

降解转化。

二、简单原理

•酶是一类具有蛋白质性质的、高分子的生物催化剂。土壤

酶是活的有机体所合成的，或者在其生长过程中分泌与体

外，或者在其死亡后自溶而释放出。所有的酶均能显示其

活性。

•显著的酶的特征之一是其催化反应的专一性。例如，脲酶

对尿素的催化降解就及其专一。

•土壤中的酶的来源有二种。一是来自于高等植物根系分泌

及土壤中动植物残体分解。二是来源于土壤微生物的生命

活动。

•土壤酶可分为胞内酶和胞外酶两种。胞外酶或溶出后的胞

内酶进入土壤结构后，均具有相对稳定性，如能抗微生物

分解和抗热稳定性等。它们以三种形式存在于土壤中，一

是以吸附状态贮积于土壤中。二是于土壤腐殖质复合存在。

三是以游离状态存在。

对于脲酶，它能促使尿素水解转化成氨、二氧化

碳，反应如下:

Ο

脲酶

Η2ΝCΝΗ22ΝΗ3+CΟ2

在土壤中，在pH值为6.5~7.0是脲酶活性最大，

通过测定释放出的NH3量，可以确定脲酶的活性。

土壤中脲酶活性一般以37℃培养48小时每克土壤

释放出的NH3–N毫克数表示。

三、步骤概要

1、取二个250ml锥形瓶，各加入10.0克土壤，再各

加入10ml混合磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）。摇动

处理15分钟，使均匀。在往第一瓶内加入10ml浓

度10%的尿素溶液，再经屏内容物充分混匀，作

为试样。第二瓶内加入10ml蒸馏水，作为对照。

将两个瓶置于37℃培养箱中培养48小时（要塞上

纱布塞子）。

2、培养结束后，往两个瓶内各加入50ml2NKCL

溶液。塞紧后再振荡30分钟。到时立即将试样过

滤（滤纸可以用蒸馏水润湿）到蒸氨瓶内。

3、在过滤的间隙时间取两个50ml比色管，各加入

10,00ml4%硼酸溶液。现将50ml比色管在冷凝管

下，使冷凝管出口尖端插入硼酸溶液中，准备蒸

馏。

4、过滤完毕后，迅速往蒸氨瓶内注入20ml4N的

NaOH溶液，立即塞上塞子。接通冷凝水，加热

蒸馏。

5、当馏出液达到50ml左右，停止蒸馏。取下比色

管，将管内接收液定量转入到50ml锥形瓶中加4-5

滴指示剂（甲基红-亚甲基蓝混合液），用0.1N

HCL滴定瓶内的氨，滴定到淡紫色为终点。记录

试样和对照消耗的HCL体积V和V0（ml）。

四、计算

N(VV)14.0

氨氮0(mg/g)

W

式中，W为称取的样品重（g），N为HCL

当量浓度。

五、问题讨论

1、除了测定尿素降解产物氨外，还能有什么

方法可以测定脲酶的活性？

2、实验中为什么要加入甲苯？

3、步骤4中为什么要迅速加入NaOH？

4、如果蒸氨时吸收液倒吸到冷凝管中如何解

决？

实验二土壤的阳离子交换量

一、概述

土壤是环境中污染物迁移转化的重要场所，

土壤的吸附和离子交换能力又使它成为重

金属类污染物的主要归宿。污染物在土壤

表面的吸附剂离子交换能力又和土壤的组

成、结构等有关，因此，对土壤性能的测

定，有助于了解土壤对污染物质的净化能

力及对污染负荷的允许程度。

土壤中主要存在三种基本成份，一是无机物，而

是有机物，三是微生物。在无机物中，粘土矿是

其主要部分。粘土矿物的晶格结构中存在许多层

状的硅铝酸盐，其结构单元是硅氧四面体和铝氧

八面体。四面体硅氧层中的Si4+常被Al3+离子部分

取代；八面体铝氧层中的Al3+可部分的被Fe2+、

Mg2+等离子取代，取代的结果便在晶格中产生负

电荷。这些电荷分布在硅酸盐的层面上，并以静

电引力吸附层间存在的阳离子，以保持电中性。

这些阳离子主要是Ca2+、Mg2+、Al3+、Na+、K+和

H+等，它们往往被吸附于矿物质胶体表面上，决

定着粘土矿物的阳离子交换行为。

土壤中的有机物质主要是腐殖物质，它们可

分为三类。一类是不能被碱萃取的胡敏素，另一

类是可被碱萃取，但当萃取液酸化时析出而成为

沉淀物的腐殖酸，第三类是酸化时不沉淀的富里

酸。这些物质成份复杂，分子量不固定，结构单

元上存在各种活性基因。它们在土壤中可以提供

出很大量的阳离子交换能力，而且对重金属污染

物在土壤中有吸附、络合等行为起着重要作用。

土壤存在的这些阳离子可被某些中性盐水溶

液中的阳离子交换。若无副反应时，交换反应可