酶联免疫吸附检测技术.pptxVIP

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酶联免疫吸附检测技术;一、基本原理

采用抗原与抗体的特异反应将待检物与酶连接,通过酶与底物产生的颜色反应,用于定性或定量测定待检物。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。;测量时,首先将抗原(抗体)结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,继而加入抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性。;其所生成的颜色深浅与待检测物(抗原或抗体)含量成正比。

这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。

其方法简单,方便快速,特异性强。;二、酶及其底物

酶结合物是酶与抗体或抗原,半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物放大效应,但不同的酶选用不同的底物,将得到不同的颜色反应。;酶;三、ELISA的分类;(一)双抗体夹心法;将已知特异性抗体与固相

载体连接形成固相抗体;间接法是检测抗体最常用的方法。其原理为:利用酶标记的抗抗体检测已与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。;包被固相载体:

用已知抗原包被

固相载体;(三)竞争法;用已知特异性

抗体包被

固相载体;教师点评;思考与讨论

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