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浙江大学硕士学位论文中文摘要

Ceritinib协同增强AKT抑制剂抗胃癌作用

浙江大学药学院2018级药学

硕士研究生：王健

导师：杨波教授

丁玲副教授

中文摘要

研究目的：

PI3K/AKT信号通路的过度激活是胃癌常见的分子特征，其中心蛋白AKT的

Ser473Thr308

或位点磷酸化是该通路活化的典型特征，进而通过下游信号通路的

级联激活促进肿瘤细胞的存活和增殖并抑制凋亡，是驱动胃癌发展的重要原因。

因此，AKT是潜在的胃癌治疗靶点，目前也已经开发了多种阻断AKT磷酸化的小

分子抑制剂，且部分抑制剂已经进入临床试验阶段。然而，当前的研究数据表明

很大比例PI3K/AKT激活的胃癌患者对这些抑制剂的敏感性差，导致AKT抑制剂

临床响应率低，未能改善无进展生存期，患者无法从中获益。其原因可能是AKT

及其下游信号蛋白代偿性激活所致。临床上主要通过改造抑制剂结构抑制AKT代

偿性激活或采用合用策略解决该问题。基于此，本研究旨在寻找能有效阻断代偿

途径的治疗药物，从而增强AKT抑制剂对胃癌的治疗作用。通过胃癌传代及原代

细胞模型，本研究首先确认胃癌细胞对AKT抑制剂的敏感性与AKT及下游GSK3β

是否代偿激活密切相关，进而通过筛选发现ALK抑制剂Ceritinib能有效阻断这种

代偿激活，表现为对AKT及下游GSK3β的磷酸化显著抑制。同时，Ceritinib能协

同增强AKT抑制剂对胃癌细胞的杀灭作用。通过荷胃癌裸小鼠模型，进一步明确

了Ceritinib对增强AKT抑制剂对胃癌的实验治疗作用。而Ceritinib在临床上批准

用于治疗ALK阳性非小细胞肺癌，两药合用为增强AKT抑制剂治疗胃癌的敏感

III

浙江大学硕士学位论文中文摘要

性提供理论基础，同时为AKT抑制剂应用于胃癌临床治疗提供新思路。

研究方法：

本研究选用AKT高度激活的代表性胃癌细胞AGS、HGC27、NCI-N87、SUN-1、

MKN45和MGC803（遗传背景已确证）来考察胃癌对于AKT抑制剂敏感性的差

异，同时进一步确证AKT抑制剂抗肿瘤效果不佳的因素。采用WesternBlotting

检测考察各株胃癌细胞系中AKT及其磷酸化水平的差异；采用SRB法或MTT法

检测六株胃癌细胞AKT抑制剂半数抑制浓度（IC，50%inhibitingconcentration）；

50

采用WesternBlotting考察不同胃癌细胞系经过不同浓度AKT抑制剂处理后p-AKT

及p-GSK3β水平变化。

本研究选用对于AKT抑制剂不敏感的MKN45和MGC803及胃癌原代细胞考

察Ceritinib合用AKT抑制剂合用后对于AKT通路、细胞存活、增殖和凋亡影响。

采用WesternBlotting考察Ceritinib合用AKT抑制剂后AKT、GSK3β及其磷酸化

水平的变化；采用SRB法检测Ceritinib合用AKT抑制剂后传代细胞及胃癌存活

率的变化；利用Chou-Talalay方程计算Ceritinib和AKT抑制剂的合用指数；通过

体外克隆形成实验考察药物合用对细胞增殖的影响；对比分析显微镜拍照肿瘤细

胞给药后形态变化；通过流式细胞术结合凋亡试剂盒检测给药后肿瘤细胞凋亡比

例变化；采用WesternBlotting检测评估联合药后细胞凋亡相关蛋白的水平变化。

本研究在动物层面考察Ceritinib和AKT抑制剂AZD5363合用抗肿瘤效果。

采用MKN45皮下移植瘤模型考察Ceritinib和AZD5363抑制肿瘤生长影响；腋下