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菌检室操作规范

菌检室作为微生物检测的核心场所，其操作规范直接影响检测结果的准确性、可靠性及生物安全性。为确保检测过程科学、严谨，需对环境控制、设备使用、样本处理、检测流程、安全防护及记录管理等环节实施全流程标准化管理。以下从具体操作层面展开详细规范说明。

一、环境控制与日常管理

菌检室应根据功能划分为准备区、样本处理区、无菌操作区（生物安全柜区域）、培养区、检测区及废弃物暂存区，各区域物理分隔明确，避免交叉污染。

1.洁净度要求

样本处理区与无菌操作区需达到万级洁净环境（局部百级），需通过定期检测（每月一次）确认尘埃粒子数（≥0.5μm粒子数≤352000个/m3，≥5μm粒子数≤2930个/m3）、沉降菌（≤3个/Φ90mm·30min）符合标准。日常使用前30分钟开启净化空调系统及紫外灯（波长254nm，功率≥30W，距台面1.2m内）进行空气消毒，紫外灯累计使用1000小时需更换并记录。

2.温湿度与压差控制

样本处理区与无菌操作区温度控制在20-25℃，相对湿度40%-60%；培养区根据检测项目调整（如普通培养36±1℃，霉菌培养28±1℃），需配置温湿度监控仪（精度±0.5℃，±3%RH），每2小时记录一次实时数据，异常波动（±2℃或±10%RH）需立即排查原因并上报。不同功能区保持梯度压差（样本处理区相对于准备区+5Pa，无菌操作区相对于样本处理区+10Pa），通过压差计（精度±1Pa）每日监测并记录。

3.清洁与消毒规范

每日操作结束后，用75%乙醇（有效浓度70%-75%）擦拭台面、设备表面及地面，重点擦拭生物安全柜操作面（由内向外、由上至下）；每周五进行全面清洁，使用0.1%含氯消毒液（有效氯500mg/L）擦拭墙面、天花板及设备死角，清洁后开启臭氧发生器（浓度≥20mg/m3）消毒30分钟。清洁工具分区专用（如无菌区使用不掉纤维的超细纤维布），用后经高压灭菌（121℃，30分钟）存放于指定柜内。

二、设备操作与维护

菌检室关键设备包括生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、微生物限度检测仪、移液器及显微镜等，需建立“一机一档”，涵盖操作手册、校准记录、维修记录及使用日志。

1.生物安全柜

使用前需检查风速（0.38-0.5m/s）、紫外灯及报警装置状态，提前30分钟开启风机预热。操作时，手臂从柜前方开口缓慢水平伸入，避免快速移动干扰气流；物品放置于操作区中后部，与前窗玻璃保持10-15cm距离，避免遮挡回风口；严禁在柜内进行产生大量气溶胶的操作（如剧烈振荡），需离心的样本应使用密封离心管。操作结束后，用75%乙醇擦拭柜内表面，关闭风机前运行5分钟排出残留气溶胶，登记使用时间、风速及异常情况。

2.高压蒸汽灭菌器

装载时，物品包装需疏松（体积≤30cm×30cm×50cm），金属类与玻璃类分开放置，液体类容器需留1/3空间并松盖。灭菌参数根据物品类型设定：普通培养基121℃、15分钟；污染废弃物121℃、30分钟；玻璃器材134℃、3分钟（预真空型）。灭菌过程中观察压力（0.105-0.14MPa）与温度同步性，结束后待压力降至0、温度≤80℃方可开门，液体类需自然冷却至50℃以下再取出。每月使用生物指示剂（嗜热脂肪芽孢杆菌）验证灭菌效果，阳性对照与阴性对照同步测试，结果存档。

3.恒温培养箱

使用前校准温度（误差≤±0.5℃），通过水银温度计（精度0.1℃）多点检测（四角及中心）。培养物放置时避免堆叠（间隔≥2cm），标签朝外便于观察；需湿度控制的项目（如霉菌培养），箱内放置盛有灭菌水的托盘（每日补水），保持相对湿度60%-70%。每周清洁箱内表面（75%乙醇），每季度清理冷凝器灰尘，防止散热不良导致温度波动。

4.移液器与微生物限度检测仪

移液器需定期校准（每6个月一次），采用称重法验证（20μL档误差≤±1%，1000μL档误差≤±0.5%）。使用时需垂直吸液，缓慢松开按钮至第一档，避免吸液过快产生气泡；排液时贴壁按压至第二档，确保残留液滴完全排出。微生物限度检测仪的滤膜需提前灭菌（121℃，15分钟），过滤时保持负压稳定（-0.06--0.08MPa），过滤后用无菌镊子夹取滤膜（避免触碰滤面），菌面朝上贴于培养基。

三、样本处理与检测流程

1.样本接收与编号

样本需由专人接收，核对送检单信息（样本名称、来源、数量、检测项目、采样时间）与实物一致性，检查包装是否完整（无渗漏、无破损），低温保存样本需确认运输温度（2-8℃）符合要求。接收后立即编号（格式：年+月+日+流水号，如20240315001），同时标注样本类型（如食品、药品、环境拭子），登记于《样本接收记录表》（含接收时间、状态、送检人）。