生物化学技术6凝胶过滤11市公开课金奖市赛课一等奖课件.pptxVIP

第六章凝胶过滤

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凝胶过滤是20C-60Y发展起来一个分离纯

化方法；又称分子筛层析、排阻层析

原理：凝胶含有网状结构，小分子物质

能进入其内部，而大分子物质却被阻挡在

外部，从而使混合溶液中各种组分按分子

质量不同进行筛分

特点：设备简朴，操作方便、重复性好、

回收率高

用途：分离纯化蛋白质、核酸、多糖、

激素等，测定蛋白质分子质量、样品浓缩

和脱盐等

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目

n掌握凝胶分类和性质

n掌握凝胶过滤基本原理

n熟悉凝胶过滤操作与应用

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第一节凝胶分类及性质

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凝胶是一类不溶于水，但在水中有较大膨胀度和较

好分子筛作用化合物

当前主要有葡聚糖凝胶、天然琼脂糖和交联琼脂糖；

另一方面，尚有聚丙烯酰胺凝胶（生物胶）、交联葡

聚糖与双丙烯酰胺共聚凝胶，以及交联琼脂糖与葡聚

糖共价结合凝胶等

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一、葡聚糖凝胶

商品名称：Sephadex，由葡聚糖[右旋糖酐(G型)]和3-氯-

1，2环氧丙烷(交联剂)以醚键交联而成

在交联葡聚糖G-25、G-50中加入羟丙基后，即可构成烷

基化（LH型）葡聚糖凝胶

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1.理化性质

①性状：外观为白色珠状颗粒，在显微镜下可见表面为网状皱纹

②溶解性：带有大量羟基，亲水性好，因此在水溶液或电解质溶

液中极易膨胀

③型号：SephadexG-n（n越大，则交联度越小，而膨胀度、吸

水量和筛孔直径则越大

④应用：Ø凝胶过滤层析：以G型Sephadex为固定相，水为流动

相，对水溶性物质进行分离

Ø凝胶渗入层析：以LH型Sephadex为固定相，以有机

溶剂为流动相，对脂溶性物质进行分离

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2.稳定性

在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液和有机溶剂

中是稳定、不溶解

强酸或氧化剂溶液时，则容易使糖苷键水解断裂

在室温下长期保留时，应加入适量防腐剂如CHCl3

、0.05％NaN或20％EtOH等

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3.吸附性

含少许羧基基团，为弱酸性物质。能与带正电荷分离物

如碱性蛋白质等发生吸附

克服办法：提升洗脱液离子强度至0.05以上，可克服此

非特异性吸附

①惯用含有NaCl缓冲液作洗脱液。

②新购得葡聚糖凝胶对蛋白质往往有不可逆吸附性能，

即使吸附数量较少，但在定量测定或者分离纯化很难得到

物质时，也需先用易得到蛋白质进行预层析，以便消除其

影响

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葡聚糖凝胶对芳香族化合物或杂环化合物以及一些

凝集素含有较强吸附作用，若采用凝胶过滤层析分离

它们时，往往利用是吸附性能，而不是排阻原理

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二、琼脂糖凝胶

琼脂糖是从琼脂中分离出来一个由D-半乳糖和3,6脱水L-半

乳糖连接而成多糖。其商品名因生产厂家不同而异

瑞典、中国：Sepharose

美国：Bio-gelA15m，排阻分子量小于15million分子，即15

×106（排阻程度）

英国：Segavac，粉状、颗粒状

丹麦：Gelarose

除Segavac外，都是以珠状琼脂糖凝胶形式发售

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1.性质

①高温时呈液态，经凝集即成琼脂糖凝胶

②对尿素、盐酸胍等含有较强抵抗力，在pH4.0~9.0缓冲

液中稳定

③层析流速较高

④干胶易脱水破裂，普通存储于含防腐剂水溶液中，避

免猛烈搅拌