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pcr上岗证培训试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共60分）

1.以下关于PCR技术基本原理的描述，错误的是：

A.依赖DNA聚合酶的链式反应

B.扩增对象为特定DNA片段

C.反应过程包括变性、退火、延伸三个阶段

D.退火温度需高于引物Tm值5-10℃

答案：D

解析：退火温度通常设定为低于引物Tm值5℃左右，过高会导致引物无法与模板结合。

2.临床PCR实验室分区中，哪一区域需设置空气压力为负压？

A.试剂准备区

B.标本处理区

C.扩增区

D.产物分析区

答案：B

解析：标本处理区（核酸提取区）需保持负压，防止含核酸气溶胶的空气扩散至其他区域。

3.实时荧光定量PCR中，Ct值的定义是：

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物量达到平台期的循环数

C.引物与模板完全结合的时间点

D.荧光信号首次检测到的时间点

答案：A

解析：Ct（CycleThreshold）值指荧光信号达到设定阈值时所经历的循环次数，是定量分析的核心参数。

4.以下哪种物质最可能导致PCR抑制？

A.基因组DNA

B.肝素

C.dNTP

D.Taq酶

答案：B

解析：肝素是常用抗凝剂，可与DNA聚合酶结合抑制其活性，导致扩增失败。

5.PCR实验室日常消毒中，对核酸气溶胶最有效的处理方法是：

A.75%乙醇擦拭

B.紫外线照射（254nm）

C.含氯消毒液喷洒

D.甲醛熏蒸

答案：B

解析：紫外线（254nm）可破坏核酸的嘧啶二聚体结构，有效降解空气中的核酸气溶胶。

6.关于引物设计的基本原则，错误的是：

A.引物长度通常为18-25个核苷酸

B.避免引物内部形成二级结构

C.两条引物的Tm值差异应大于5℃

D.引物3’端避免连续3个G/C

答案：C

解析：两条引物的Tm值应尽量接近（差异≤2℃），以保证同时退火结合模板。

7.进行HBV-DNA定量检测时，若阳性对照未扩增，阴性对照正常，最可能的原因是：

A.样本核酸提取失败

B.扩增试剂失效（如Taq酶失活）

C.加样时污染

D.仪器温度校准偏差

答案：B

解析：阳性对照未扩增而阴性对照正常，提示扩增体系本身问题（如酶、引物或dNTP失效），而非污染或样本问题。

8.以下哪项不属于PCR实验室生物安全的核心要求？

A.实验人员穿戴防护服、手套、口罩

B.所有废弃物高压灭菌后处理

C.实验区与非实验区严格分隔

D.每日实验前检测仪器温度准确性

答案：D

解析：仪器温度准确性属于质量控制范畴，生物安全核心要求包括人员防护、废弃物处理和区域分隔。

9.实时荧光PCR仪的荧光通道校准应使用：

A.标准品DNA

B.荧光校准液（如ROX）

C.无水乙醇

D.去离子水

答案：B

解析：荧光通道校准需使用特定波长的荧光校准液（如ROX），确保各通道检测灵敏度一致。

10.以下哪种情况会导致扩增曲线出现“平台期延迟”？

A.模板浓度过高

B.引物浓度过高

C.dNTP浓度不足

D.Mg2+浓度过高

答案：C

解析：dNTP是合成DNA的原料，浓度不足会导致延伸阶段提前终止，平台期延迟。

11.临床PCR检测报告中，“未检测到目标核酸”的正确解释是：

A.样本中一定不含目标病原体

B.样本中目标核酸浓度低于检测下限

C.实验过程存在污染

D.仪器故障导致结果不准确

答案：B

解析：“未检测到”仅表示目标核酸浓度低于方法学检测下限，不能完全排除存在可能。

12.核酸提取过程中，加入RNaseA的主要目的是：

A.裂解细胞

B.去除RNA干扰

C.保护DNA完整性

D.沉淀蛋白质

答案：B

解析：RNaseA可特异性降解RNA，避免RNA对DNA检测（如HBV-DNA）的干扰。

13.PCR实验室“单一流向”指的是：

A.人员、物品从清洁区→半污染区→污染区单向移动

B.实验室内空气从污染区→半污染区→清洁区流动

C.试剂从扩增区→标本处理区→试剂准备区传递

D.废弃物从清洁区→污染区集中处理

答案：A

解析：单一流向要求人员和物品按“试剂准备区→标本处理区→扩增区→产物分析区”单向移动，避免交叉污染。

14.关于内参基因（内标）的作用，错误的是：

A.监测核酸提取效率

B.排除假阴性结果

C