11医学基础化学可见-紫外分光光度法.pptVIP

第11章可见-紫外分光光度法;仪器分析：主要利用物理学原理进行分析的方法则

称为仪器分析法。

如：光谱分析法，色谱分析法，质谱分析（MS）法,

电化学分析法，核磁共振（NMR）分析法等。;分光光度法是根据物质的吸收光谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分析的一种仪器分析方法。;5、应用广泛—医药、卫生、环保、化工;第一节分光光度法基本原理

第三节可见分光光度法

第四节提高测量灵敏度和准确度的方法;本章教学要求;光的频率=;单色光——单一波长的光束

复色光——含有多种波长的光束

电磁波谱——以波长大小顺序排列的电磁波谱图;二、溶液的颜色与光的选择吸收;三、分光光度法基本原理;它表示光透过溶液的程度，T值越大，说明该溶液对光吸收越小。;吸光度愈大，溶液对光的吸收愈多;（二）Lambert-Beer定律;1852年，Beer从实验中找到了A与溶液浓度的关系式：A=k2c

k2为与被测物性质、入射光波长、溶剂、液层厚度和温度有关的常数;;所以，k和?的换算关系为：?=kM;在分光光度计上，用不同波长的单色光作入射光，按波长由短到长的顺序依次通过同一溶液，测得与各波长相对应的吸光度A，以A为纵坐标，波长?为横坐标作图，所得曲线即为该溶液的吸收光谱;吸收光谱说明，一种物质对不同波长的光的吸收程度是不同的;;[例2]一有色溶液的浓度为c，透光率为T。

求浓度为原来的1/2时，透光率为多少？;第三节可见分光光度法;;1.光源系统——提供波长范围为360~1000nm的连续光谱。可见光光源为钨灯，要求强度高，稳定性好;5.结果显示记录系统

检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理;真空光电管;光电倍增管（photomultipliertube,PMT）;二、测定方法

——可见紫外分光光度法主要用于定量分析。;c（mg/L）;为消除溶剂或其他有色物质对入射光的吸收，消除光在溶液中的散射和比色杯对光的反射等与被测物吸收无关的因素的影响，必须采用空白溶液作对照。

测定时，首先将空白溶液置于光路，调节仪器的“Zero”键，使A=0或T=100%，然后开始测定标准溶液或被测液的A。;2.标准对照法（直接比较法）——根据Lambert-BeerLaw，以该物质吸收光谱图中的?max为入射光。

首先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液CS，测其AS,有：AS=kSCSl

再将样品溶液推入光路，测其AX，则试样溶液的浓度CX为：Ax=kxCxl

由于使用同一入射波长的光，测定同样的物质，采用相同的比色皿，则：;3.分光光度法的特点

;第四节显色反应及影响因素;（2）配合反应

某些金属离子，阴离子与某些化合物作用生成有颜色的配合物或螯合物进行显色。;（3）重氮化–偶合反应

如利用对氨基苯磺酸与HNO2重氮化，然后与α-萘胺偶合成红色化合物，用于测定NO2-。;2、显色剂必须具备的条件：;二、影响显色反应的因素;第五节分光光度法的误差和测定的条件选择;2、测定的条件选择;第五节紫外分光光度法简介;作业：

5，6,7