CN110117662B 大麻哈鱼的荧光pcr检测方法及其引物和探针 （福建译宁科技有限公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN110117662B(45)授权公告日2023.10.13

(21)申请号201810122129.8

(22)申请日2018.02.07

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN110117662A

(43)申请公布日2019.08.13

(73)专利权人福建译宁科技有限公司

地址350014福建省福州市晋安区鼓山镇

福马路420号后浦安置房1号楼三层3A386室

专利权人杭州海关技术中心

(72)发明人吴姗虞惠贞董强

(74)专利代理机构深圳紫晴专利代理事务所(普通合伙)44646

专利代理师雒盛林

(51)Int.CI.

C12Q1/6888(2018.01)

C12Q1/686(2018.01)

C12N15/11(2006.01)

(56)对比文件

CN105039329A,2015.11.11

CN103122373A,2013.05.29

孙毅.基于线粒体基因COX1、Cytb和ND4的鲑科鱼类的系统发育.畜牧与饲料科学.2015,第36卷(第9期),9-17.

JunliFeng等.Areal-timepolymerasechainreactionmethodforthe

identificationoffourcommerciallyimportantsalmonandtrout

species.MitochondrialDNA.2015,1-8.

李进波等.实时荧光PCR法鉴定食品中鲑亚科鱼成分.食品科学.2013,34(20),194-198.

审查员王航

权利要求书2页说明书7页

(54)发明名称

大麻哈鱼的荧光PCR检测方法及其引物和探针

(57)摘要

CN110117662B本发明公开了一种大麻哈鱼的荧光PCR检测方法及其引物和探针，该方法设计大麻哈鱼的引物和探针，并提取大麻哈鱼样品中的DNA;根据所述引物和探针及样品DNA,进行实时荧光PCR扩增反应，获得检测结果；将检测结果与预设的Ct值比较，判定样品特性。本发明可有效地以实时荧光

CN110117662B

CN110117662B权利要求书1/2页

2

1.一种大麻哈鱼的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针由下表中的序列组成：

检测物种

大麻哈鱼

引物和探针

OK-F

0K-R

0X-P

序列(5-3)

TGCACTACACCTCCGACATI

TCCGTAATAAAGTCCCCGGG

FAM-TCCTCTGTCTGCCACATCTG-Eclipse

其中，OK-F表示上游引物；OK-R表示下游引物；OK-P表示探针。

2.一种大麻哈鱼的荧光PCR检测方法，其特征在于，至少包括如下步骤：

S1:设计大麻哈鱼的引物和探针，所述引物和探针由下表中的序列组成：

检测物种

引物和探针

序列(5-3)

大麻哈鱼

0KF

0K-R

0K-P

TGCACTACACCTCCGACATT

TCCSTAATAAAGTXXXCGG

FAH-TCCTCTGTCTGOCACATCTG-Eclipse

其中，OK-F表示上游引物；OK-R表示下游引物；OK-P表示探针；

S2:提取大麻哈鱼样品中的DNA;

S3:根据所述引物和探针及DNA,进行实时荧光PCR扩增反应，获得检测结果；

S4:将检测结果与预设的Ct值比较，判定样品特性。

3.根据权利要求2所述大麻哈鱼的荧光PCR检测方法，其特征在于，所述上游引物的浓度为10pmol/μL,下游引物的浓度为10pmol/μL,探针的浓度为10pmol/μL。

4.根据权利要求3所述大麻哈鱼的荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤S2具体为：

S21:获取0.2g大麻哈鱼样品，并在液氮中研磨；

S22:使用DNA抽提试剂盒进行DNA抽提；

S23:将抽提后的DNA溶解在100μL水中，获得DNA液。

5.根据权利要求4所述大麻哈鱼的荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤S3具体为：

S31:获取10μL的PremixExTaq,0.4μL的上游引物，0.4μL的下游引物，0.4μL的探针以及1μL的DNA液，并加水补足至20μL;

S32:使用实时荧光PCR