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临床微生物学概论

（第一部分）复旦大学附属华山医院抗生素研究所

2标本采集细菌的分离培养和鉴定抗菌药物敏感性试验主要内容

3正常菌群在正常人体体表与外界相通的腔道：口腔、鼻咽腔、肠道、泌尿生殖道存在的多种微生物。在机体免疫功能正常时对人体有益无害，属人类正常微生物群或环境中通常不致病的微生物，因以细菌和真菌为主，故称“正常菌群”。正常菌群的存在是保持人体健康的重要因素反映出在正常情况下，宿主、正常菌群和外界环境相互适应，保持平衡状态。

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5病原微生物病原微生物(pathogen)：引起人类感染性疾病的微生物称为病原微生物或致病微生物。细菌：如痢疾志贺菌、肠杆菌科细菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌属等病毒：如单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、乙型肝炎病毒等真菌：如念珠菌属、曲霉属、毛霉属以及新型隐球菌等其他：如支原体、衣原体、螺旋体

6临床常见的病原微生物革兰阳性菌：葡萄球菌、溶血性链球菌、肠球菌革兰阴性菌：需氧球菌：脑膜炎和淋病奈瑟球菌、卡他莫拉菌需氧杆菌：不动杆菌、假单胞菌、产碱杆菌、嗜血杆菌需氧和兼性厌氧：肠杆菌科细菌如大肠杆菌、肺杆、伤寒、志贺菌。厌氧细菌：脆弱拟杆菌、痤疮丙酸杆菌等

7苛养菌定义：是一类生长需要特殊营养物质的细菌，与许多感染性疾病有关，其分离培养较为困难。营养要求高肺炎链球菌：培养基内要加入血或血清流感嗜血杆菌：X、V因子比较娇嫩、对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱。培养条件：5～10％CO2、35℃培养、24～48h呼吸道其他快生长细菌的覆盖使分离率非常低

8厌氧菌是一群专性厌氧，必须在无氧环境下才能生长繁殖的细菌。根据能否形成芽胞，可将厌氧菌分成两大类。厌氧芽胞梭菌属无芽胞厌氧菌厌氧芽胞梭菌属：破伤风梭菌、产气荚膜杆菌、肉毒梭菌、艰难梭菌无芽胞厌氧菌：拟杆菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属、消化链球菌属等

9标本的采集抗菌药使用前正确的部位正确的时间足够的数量无菌的容器特殊要求应在化验单上注明

10主要的临床标本种类标本类型呼吸道标本深部咳出痰、支气管灌洗液咽拭子、鼻气管吸出液、气管吸出液尿液血液脑脊液伤口、脓液其它体液胸水、心包液、引流液、腹水、滑囊液

11标本的处理涂片光镜检查诊断病原最基本和快速的方法：脑脊液直接形态学检查革兰染色或特殊染色分离培养和鉴定动物接种免疫学检查

12痰标本主要病原菌：肺炎链球菌，克雷伯菌属，流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌。非病原菌：酵母菌，草绿色链球菌，凝固酶阴性葡萄球菌病人需用水清洁口腔，深咳肺部痰，不要唾液#1进行革兰染色以评价标本是否适于接种。向临床医生尽快报告重要的革兰染色结果#2#3好：很少扁平上皮细胞奥普托欣纸片CO2中孵育48小时#4接种巧克力平皿，血平皿和麦康凯平皿#5拒绝：大量扁平上皮细胞肺炎克雷伯菌对重要病原菌进行鉴定药敏试验金黄色葡萄球菌肺炎链球菌胆汁溶菌＋奥普托欣＋流感嗜血杆菌

13革兰染色评估呼吸道标本是否合格？有代表性的好标本中性粒细胞多白细胞25/低倍视野鳞状上皮细胞少＜10/低倍视野

14痰标本10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收

19#1bab尿培养主要病原菌：大肠埃希菌，变形杆菌，克雷伯菌，其他革兰阴性杆菌，肠球菌，腐生葡萄球菌，纯的金葡球菌#2接种血平皿和麦康凯平皿#3空气孵育24小时收集中段尿a#4菌落计数0.001ml接种环若?2种菌生长，对每种菌进行鉴定和药敏试验；若2种菌生长，报告“混合菌群”#5注意:革兰阴性杆菌在血平皿和麦康凯平皿上均生长良好革兰阳性球菌仅在血平皿上生长良好GNR#675,000cfu/ml50,000cfu/ml100,000cfu/mlGPC

20脓，吸取物或组织标本主要病原菌：金葡菌，化脓链球菌，其他β溶血链球菌，绿脓，其他革兰阴性杆菌。非病原菌：凝固酶阴性葡萄球菌，少量的棒状革兰阳性杆菌用酒精消毒伤口周围皮肤最好的标本是吸取物和组织最差的标本是拭子#1接种血平皿和麦康凯平皿如果是吸取物或组织，进行革兰染色，将重要结果通知临床医生#2#3铜绿假单胞菌中孵育48小时#4对1或2种重要病原菌进行鉴定药敏试验金黄色葡萄球菌为主β溶血链球菌肺炎克雷伯菌混合的2种肠道革兰阴性杆菌：2种均报告；当检出3种或更多病原菌时，报告“混合菌丛”并描述性列出假单胞菌，金葡菌，变形杆菌，肠道革兰阴性杆菌等。#5

21血培养主要病原菌：沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金葡菌、肺链、流感以下菌应视为非病原菌(除非1次血培养分离出)：芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌从两个独立的皮肤位点采血，每瓶采集10ml#135℃自动化仪器中孵育5天每天检查浊度并翻转培养瓶#2#318小时后传进行次代培养当培养瓶显示细菌生