生物制药层析柱装填技师（初级）考试试卷及答案.docVIP

生物制药层析柱装填技师（初级）考试试卷及答案

一、填空题（每题1分，共10分）

1.层析柱常用填料基质包括琼脂糖、______和硅胶等。

2.装填时填料匀浆体积分数一般为______。

3.柱效评价指标包括理论塔板数（N）和______。

4.装填前需检查柱的______，确保无漏液。

5.离子交换填料的核心是______基团。

6.排除柱内气泡可通过______或轻敲柱壁。

7.疏水层析常用______洗脱（降低盐浓度）。

8.层析柱内径与长度比一般不超过______。

9.装填后需用______平衡柱床。

10.亲和填料的核心是连接______的载体。

二、单项选择题（每题2分，共20分）

1.不属于层析柱装填方法的是（）

A.重力沉降法B.加压装填法C.离心装填法D.搅拌装填法

2.填料匀浆应沿柱壁______加入（避免气泡）

A.快速B.缓慢C.间断D.大量

3.柱效下降的常见原因不包括（）

A.填料压实不均B.气泡残留C.平衡充分D.柱床塌陷

4.目标蛋白带负电时应选（）

A.阴离子交换填料B.阳离子交换填料C.疏水填料D.亲和填料

5.装填加压压力一般不超过______MPa

A.0.1B.0.5C.1.0D.2.0

6.疏水层析平衡常用______缓冲液

A.低盐B.高盐C.酸性D.碱性

7.柱床应保留至少______cm空间（避免流出液接触）

A.1B.3C.5D.10

8.亲和配基与载体连接需保证（）

A.配基暴露B.载体暴露C.均隐藏D.无要求

9.柱床塌陷最可能因（）

A.平衡不足B.流速过快C.填料浓度高D.柱温高

10.评价分离选择性的指标是（）

A.理论塔板数B.分离度C.拖尾因子D.保留时间

三、多项选择题（每题2分，共20分）

1.影响装填质量的因素包括（）

A.填料浓度B.装填压力C.柱温D.缓冲液pH

2.装填后验证项目有（）

A.柱效测定B.分离度验证C.填料完整性D.气密性检查

3.常用填料基质包括（）

A.琼脂糖B.葡聚糖C.纤维素D.聚苯乙烯

4.装填常见问题有（）

A.气泡残留B.柱床不均C.柱床塌陷D.漏液

5.离子交换填料带电基团类型（）

A.季铵基B.羧甲基C.磺酸基D.氨基

6.疏水层析洗脱方式（）

A.线性梯度B.阶梯洗脱C.反向洗脱D.等度洗脱

7.亲和层析类型（）

A.抗体-抗原B.金属螯合C.疏水亲和D.离子亲和

8.排气泡方法（）

A.轻敲柱壁B.反向冲洗C.静置消泡D.加热

9.柱使用前准备（）

A.柱清洗B.填料溶胀C.平衡液配制D.压力测试

10.柱性能评价指标（）

A.理论塔板数B.分离度C.拖尾因子D.保留时间

四、判断题（每题2分，共20分）

1.填料浓度越高装填效果越好（）

2.装填后可直接上样（无需平衡）（）

3.气泡残留会降低柱效（）

4.离子交换缓冲液pH应远离蛋白等电点（）

5.疏水层析依赖盐浓度变化洗脱（）

6.亲和配基无需固定化（）

7.加压越大柱床越稳定（）

8.柱床越高柱效一定越好（）

9.柱使用后用去离子水冲洗保存（）

10.理论塔板数越大柱效越高（）

五、简答题（每题5分，共20分）

1.简述层析柱装填基本步骤

答案：①填料准备：用平衡液溶胀，配成50%-70%匀浆；②柱准备：清洗、检查气密性，安装柱网；③装填：沿柱壁缓慢加匀浆，重力/低压压实；④排气泡：轻敲或反向冲洗；⑤平衡：用平衡液冲洗至流出液参数稳定；⑥验证：测柱效、分离度。

2.影响柱效的常见因素

答案：①填料：粒径不均、压实不均、气泡；②操作：流速过快、压力波动、柱床塌陷；③环境：柱温不稳定、缓冲液参数变化；④样品：粘度高、杂质多导致污染。这些因素破坏柱床结构，增加扩散阻力。

3.疏水层析平衡与洗脱原理

答案：平衡时，高盐浓度使蛋白疏水区域暴露，与填料疏水基团结合；洗脱时，降低盐浓度（梯度），减弱疏水作用，蛋白按疏水性从弱到强洗脱。盐浓度降低减少疏水区域暴露，促进解吸。

4.亲和配基选择原则

答案：①特异性：与目标蛋白特异性结合；②稳定性：层析条件下不降解；③亲和力适中：过高难洗脱，过低结合弱；④可固定化：能共价连接载体且不影响活性；⑤经济性：来源广、成本低。

六、讨论题（每题5分，共10分）

1.柱效不合格（理论塔板数低）如何排查处理？

答案：①检查气泡：反向冲洗或轻敲排除；②填料压实：重新装填（调整匀浆浓度、加压方式）；③平衡：延长平衡时间至参数稳定；④填料：更换粒径分布均匀的合格填料；⑤流速：控制流速避免柱床塌陷；⑥缓冲液：确认pH/电导率符合要求后复测。

2.装填质量对下游纯化的影响

答案：①柱效差→分离度低，杂质难分离，后续负荷增加；②气泡/柱床不均→峰展宽，回收率低，纯度不达标；③压实不均→压力过高，损坏柱/填料；④合格装填→批次稳定，减少返工，提高效率。不