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生物制药纯化工程师岗位招聘考试试卷及答案

一、填空题（每题1分，共10分）

1.单抗捕获常用的亲和层析填料是______。

2.离子交换层析依赖目标蛋白的______差异结合。

3.除菌过滤的滤膜孔径为______μm。

4.TFF（切向流过滤）属于______（死端/切向）过滤。

5.疏水层析中，目标蛋白在______（高/低）盐下结合填料。

6.缓冲液酸性调节剂常用______。

7.活性收率=______×100%。

8.去除内毒素常用______亲和层析。

9.层析柱再生常用______溶液清洗。

10.病毒灭活常用______（如低pH）方法。

二、单项选择题（每题2分，共20分）

1.单抗特异性捕获首选层析是：

A.离子交换B.蛋白A亲和C.疏水D.凝胶过滤

2.降低缓冲液pH优先选：

A.HClB.柠檬酸C.NaOHD.醋酸

3.除菌过滤属于：

A.绝对过滤B.深层过滤C.预过滤D.粗过滤

4.TFF截留分子量（MWCO）通常比目标蛋白：

A.小10-20kDaB.大10-20kDaC.相等D.无关

5.疏水层析洗脱用：

A.降盐B.升盐C.变pHD.加变性剂

6.带负电蛋白选______离子交换填料：

A.阴B.阳C.凝胶D.蛋白A

7.单抗低pH灭活典型条件：

A.pH3.0-3.5，30minB.pH5.0-6.0，1hC.pH7.0-8.0，2hD.pH2.0-2.5，10min

8.有效去内毒素的方法：

A.0.22μm过滤B.疏水层析C.阴离子交换D.凝胶过滤

9.层析柱清洗不包括：

A.去残留蛋白B.灭活微生物C.再生填料D.提高流速

10.粗品（100U/mL，100mL）纯化后（500U/mL，20mL），活性收率为：

A.10%B.20%C.50%D.100%

三、多项选择题（每题2分，共20分）

1.单抗纯化常用层析：

A.蛋白A亲和B.阳离子交换C.阴离子交换D.疏水

2.缓冲液配制注意事项：

A.准确称量B.超纯水配制C.过滤除菌D.调pH

3.TFF操作要点：

A.控跨膜压（TMP）B.稳切向流速C.定期清洗D.截留体积越大越好

4.内毒素控制环节：

A.原料控制B.设备灭菌C.缓冲液除菌D.填料选择

5.层析柱再生步骤：

A.强碱清洗B.强酸清洗C.有机溶剂冲洗D.平衡液平衡

6.病毒清除验证方法：

A.低pH灭活B.纳米过滤C.层析去除D.加热

7.蛋白复性方法：

A.透析B.稀释C.柱上复性D.变性剂梯度洗脱

8.纯化CQA（关键质量属性）：

A.蛋白纯度B.活性回收率C.内毒素D.病毒残留

9.除菌过滤验证项目：

A.细菌挑战B.完整性测试C.流速测试D.蛋白截留

10.疏水层析影响因素：

A.盐浓度B.pHC.温度D.填料疏水强度

四、判断题（每题2分，共20分）

1.离子交换基于分子量差异分离。（）

2.疏水层析低盐下结合蛋白。（）

3.TFF是死端过滤。（）

4.0.22μm滤膜可去所有微生物。（）

5.蛋白A结合单抗Fc段。（）

6.缓冲液pH接近pI提高蛋白溶解度。（）

7.疏水层析洗脱需降盐。（）

8.内毒素是革兰氏阳性菌成分。（）

9.层析柱用1MNaOH再生。（）

10.病毒灭活仅能化学方法。（）

五、简答题（每题5分，共20分）

1.简述蛋白A亲和层析捕获单抗的原理及步骤。

2.简述TFF操作要点。

3.简述纯化工艺内毒素控制关键环节。

4.简述层析柱清洗再生方法及目的。

六、讨论题（每题5分，共10分）

1.单抗纯化中蛋白A柱回收率偏低的原因及解决措施。

2.如何确定层析工艺的CPP（关键工艺参数）及CQA？

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答案部分

一、填空题答案

1.蛋白A填料

2.电荷

3.0.22

4.切向

5.高

6.HCl（盐酸）

7.（纯化后总活性/粗品总活性）

8.内毒素

9.NaOH（氢氧化钠）

10.低pH孵育

二、单项选择题答案

1.B2.A3.A4.A5.A6.A7.A8.C9.D10.D

三、多项选择题答案

1.ABCD2.ABD3.ABC4.ABCD5.ACD6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABCD

四、判断题答案

1.×2.×3.×4.√5.√6.×7.√8.×9.√10.×

五、简答题答案

1.原理：蛋白A特异性结合单抗Fc段，杂蛋白不结合；步骤：①柱平衡（pH7.0-7.4缓冲液）；②上样（单抗结合）；③洗杂（去未结合杂蛋白）；④洗脱（低pH3.0-3.5解离）；⑤再生（NaOH清洗+平衡）。

2.①控TMP1bar，避免膜损伤；②稳切向流速（1-5L/min）防浓差极化；③定期排液清洗；④选合适MWCO（比目标蛋白小10-20kDa）；⑤缓冲液pH/盐浓度兼容蛋白。

3.①原料无内毒素；②设备/耗材无热原；③缓冲液过滤/灭菌；