生物制药层析柱装填技师（中级）考试试卷及答案.docVIP

生物制药层析柱装填技师（中级）考试试卷及答案

一、填空题（10题，每题1分）

1.生物制药层析常用填料按原理分离子交换型、______、亲和型、疏水作用型等。

2.层析柱装填多采用______法（避免填料干涸）。

3.评价柱效的核心指标是______（符号表示）。

4.填料装填前需______处理（去除气泡、杂质）。

5.离子交换平衡液pH应______目标蛋白pI（保证电荷）。

6.凝胶过滤填料需匹配目标蛋白______范围。

7.装填后用______冲洗稳定床层。

8.柱效低常见原因是床层存在______。

9.亲和填料需偶联______（特异性捕获蛋白）。

10.层析柱长期保存需加______（防微生物污染）。

一、填空题答案

1.凝胶过滤型（分子筛型）

2.湿法

3.理论塔板数（N）

4.溶胀/脱气

5.远离（高于/低于）

6.分子量分离

7.平衡缓冲液

8.气泡/裂缝

9.特异性配基

10.抑菌剂（20%乙醇/NaN?）

二、单项选择题（10题，每题2分）

1.分离分子量差异大的蛋白选哪种填料？

A.离子交换B.凝胶过滤C.亲和D.疏水

2.装填错误操作是？

A.缓慢倒填料B.静置稳定C.快速加压D.防干涸

3.理论塔板数N计算不含的参数是？

A.保留时间B.峰宽C.柱长D.填料粒径

4.离子交换填料装填前用______平衡？

A.去离子水B.高盐液C.低盐液D.有机溶剂

5.凝胶过滤柱效低最可能原因是？

A.溶胀不足B.pH不当C.配基脱落D.疏水过强

6.柱压升高不包括的原因是？

A.填料堵塞B.气泡积累C.流速过快D.配基饱和

7.亲和层析装填注意点是？

A.高压装填B.防配基变性C.直接上样D.反复冻融

8.装填合格的标志是？

A.峰拖尾B.N值高C.柱压波动D.床层倾斜

9.维护错误做法是？

A.定期反冲B.防微生物C.纯水处理保存D.记录次数

10.疏水层析装填用______缓冲液？

A.低盐B.高盐C.中性D.酸性

二、单项选择题答案

1.B2.C3.D4.C5.A6.D7.B8.B9.C10.B

三、多项选择题（10题，每题2分，多选/少选不得分）

1.影响柱效的因素有？

A.填料粒径B.装填均匀性C.流速D.样品浓度

2.装填前准备工作含？

A.柱体清洗B.填料溶胀C.脱气D.配平衡液

3.离子交换填料类型？

A.阳离子交换B.阴离子交换C.混合床D.凝胶型

4.凝胶过滤应用？

A.分子量测定B.脱盐C.蛋白纯化D.浓度测定

5.常见问题及解决方法？

A.柱压高→反冲B.峰拖尾→重装填C.柱效低→换填料D.气泡→排气

6.亲和层析关键步骤？

A.配基偶联B.平衡C.洗脱D.再生

7.装填需避免的操作？

A.填料干涸B.快速倾倒C.高压装填D.引入气泡

8.疏水层析特点？

A.高盐结合B.低盐洗脱C.疏水作用D.需特异性配基

9.柱保存注意事项？

A.加抑菌剂B.防冷冻C.密封D.定期冲洗

10.柱性能评价指标？

A.N值B.分离度C.柱压D.保留时间

三、多项选择题答案

1.ABCD2.ABCD3.AB4.ABC5.ABD6.ABCD7.ABCD8.ABC9.ABCD10.ABCD

四、判断题（10题，每题2分，√/×）

1.装填流速越快，柱效越高。（×）

2.凝胶过滤分离范围越大，分辨率越高。（×）

3.离子交换高盐平衡液结合力越强。（×）

4.亲和填料可高温灭菌。（×）

5.装填后需冲洗至柱压稳定。（√）

6.柱效低仅因填料老化。（×）

7.疏水层析洗脱需降盐浓度。（√）

8.柱用后可直接去离子水保存。（×）

9.装填需垂直固定柱体。（√）

10.N值越高，柱效越好。（√）

四、判断题答案

1.×2.×3.×4.×5.√6.×7.√8.×9.√10.√

五、简答题（4题，每题5分）

1.简述离子交换填料装填步骤

答案：①填料溶胀：加缓冲液搅拌/超声脱气，静置4-8小时；②柱体准备：清洗后垂直固定，装筛板；③湿法装填：缓慢倒入溶胀填料，加缓冲液打开下端出口，控制流速1ml/min；④稳定床层：用平衡液冲洗至柱压稳定；⑤柱效检测：进标准蛋白，计算N值（需2000/米）。

2.如何判断装填合格？

答案：①视觉：床层平整无气泡/裂缝；②柱压：平衡液冲洗时稳定无波动；③柱效：标准样品N值达标；④峰形：对称无拖尾/前沿；⑤重复性：重复进样保留时间偏差2%。

3.凝胶过滤装填注意事项？

答案：①选匹配分子量范围的填料；②充分溶胀（避免过度搅拌）；③装填流速1ml/min（防破碎）；④装填后静置30分钟；⑤操作防干燥/污染；⑥避免高压（≤0.3MPa）。

4.层析柱维护要点？

答案：①用后冲洗：平衡液冲至无残留样品；②反冲：柱压高时反向冲洗（流速为正常1/2）；③保存：加20%乙醇/0.02%NaN?密封；④防