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新生儿遗传代谢病筛查实验室检测技术规范专家共识

一、样本采集与预处理规范

（一）样本采集要求

新生儿遗传代谢病筛查（以下简称“NBS”）样本采集需严格遵循标准化操作流程，以确保样本质量符合检测要求。

1.滤纸选择：应使用经国家药品监督管理局（NMPA）批准的专用采血滤纸（如符合GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》要求的产品），滤纸需具备低背景干扰、高吸收性及化学稳定性，避免对检测指标（如氨基酸、酰基肉碱）产生交叉污染或吸附损失。

2.采血时间：足月儿应在出生后72小时且充分哺乳（至少6次）后采集；早产儿或低出生体重儿需根据临床情况调整，原则上不早于出生后48小时，且需记录哺乳次数及营养状态（如经胃管喂养时需注明），避免因喂养不足导致的代谢物水平异常（如苯丙氨酸浓度偏低）。

3.采血部位与操作：首选足跟内外侧缘（避开足后根及足底中央神经血管丰富区），局部消毒（使用75%乙醇，待完全干燥后采血），避免酒精未干导致血斑溶血或污染。采血针深度以2.0-2.5mm为宜（足月儿），早产儿可调整为1.5-2.0mm，确保血液自然流出（避免挤压，防止组织液混入）。血斑应均匀渗透滤纸正反两面，直径≥8mm，每个样本至少采集3个独立血斑（单个血斑体积≥30μL），血斑间间距≥5mm，避免重叠。

4.样本干燥与保存：采集后血片需平放于清洁、干燥、避光的环境中自然晾干（室温18-25℃，相对湿度≤60%），避免阳光直射或加热烘干（防止代谢物降解）。晾干后血片应立即放入密封袋（内附干燥剂），4℃冷藏保存（保存时间≤7天），或-20℃冷冻长期保存（保存时间≤6个月），避免反复冻融。

（二）样本运输规范

样本运输需全程记录温度与时间，确保运输过程中血片质量稳定：

-包装要求：使用防挤压、防潮的专用运输盒（内垫吸水材料），血片与冰袋（或低温保存剂）间隔放置，保持运输温度2-8℃；

-运输时限：从采集到实验室接收时间≤72小时（偏远地区可延长至96小时，但需验证延迟对检测结果的影响）；

-信息记录：随样本附运输单，注明采集时间、地点、新生儿基本信息（姓名、性别、出生日期、母亲姓名）、采集者签名及联系方式，确保样本可追溯。

二、实验室检测技术要求

（一）检测方法与设备

目前NBS主要采用串联质谱（tandemmassspectrometry,MS/MS）技术，可同时检测氨基酸、酰基肉碱及部分有机酸代谢物，覆盖≥40种遗传代谢病（如苯丙酮尿症、枫糖尿症、脂肪酸氧化障碍等）。其他辅助技术包括荧光定量法（如先天性甲状腺功能减低症TSH检测）、酶活性检测（如葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症）等，需根据筛查项目选择适配方法。

1.MS/MS设备要求：

-仪器需具备电喷雾离子源（ESI）、三重四极杆质量分析器，质量数范围覆盖50-1000Da，扫描模式支持多反应监测（MRM）；

-配备自动进样器（进样体积精度≤2%），色谱柱（C8或C18，粒径3-5μm，柱长50-100mm），流动相为含0.1%甲酸的甲醇-水溶液（梯度洗脱）；

-定期进行质量校准（每周1次）、灵敏度验证（信噪比≥10:1）及交叉污染测试（相邻样本间残留≤0.5%）。

2.试剂与标准品：

-检测试剂需经NMPA批准或符合ISO15189要求，配套校准品与质控品应溯源至国际标准物质（如NISTSRM1950）；

-内标需涵盖检测项目的同位素标记物（如13C6-苯丙氨酸、d3-辛酰肉碱），浓度经准确标定，避免内标降解（避光、-20℃保存）。

（二）检测流程

1.样本前处理：

-从保存环境取出血片后，室温平衡30分钟（避免冷凝水影响）；

-用打孔器（直径3.2mm）从血斑中心区域取1片滤纸（避免边缘稀释区），放入96孔板；

-加入含内标的萃取液（甲醇:水=80:20，含0.1%甲酸），振荡萃取30分钟（37℃，500rpm），离心（3000g，10分钟）后取上清进样。

2.仪器检测：

-设定MRM参数（如苯丙氨酸母离子m/z166.1，子离子m/z120.1；辛酰肉碱母离子m/z302.3，子离子m/z85.1）；

-每批检测包含空白对照（无血片滤纸）、校准品（5个浓度水平）及质控品（低、中、高浓度），校准曲线相关系数（R2）需≥0.99；

-单批检测样本数≤96个，连续检测超过4小时需进行仪器状态核查（如校准品响应值波动≤15%）。

3.数据处理：

-使用配套分析软件自