粮油原料掺假掺杂快速检测技术.ppt

PCR分子检测技术08物种特异性引物设计引物需设计在目标物种DNA的保守区域，通过多序列比对（如NCBI数据库）确定高度保守的序列段，确保扩增特异性。保守区选择引物长度通常为18-30bp，GC含量控制在40%-60%，避免连续相同碱基（如GGGG），3端优先选择T碱基以减少错配延伸风险。使用BLAST工具验证引物与非目标物种序列的同源性，避免连续8bp以上互补，防止交叉反应。长度与GC平衡通过软件（如PrimerPremier）分析引物自身发夹结构或引物间二聚体形成风险，自由能需小于4.5kcal/mol，确保扩增效率。二级结构规避01020403跨物种验证快