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试验九人类X小体、Y小体检测

人类X小体Y小体检测专家讲座

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一、试验目标

掌握X小体、Y小体玻片标片制作方法，

绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。

判定个体性别，为深入研究人类染色体畸变与疾病关系提供基础方法、为遗传病临床诊疗提供参考。

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二、试验原理

1949年Barr和Bertran在研究猫间期神经细胞时，发觉雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染料染色小体而雄猫没有。以后发觉人类正常女性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等细胞中都有一个这么小体，继而有些人深入发觉全部哺乳动物雌体细胞中都有一样一个小体。普通认为这种小体是两个X染色体中一个在间期发生异固缩形成，故而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处于失活状态所致，Morishima等利用放射性标识方法证实了失活状态性染色体与其它异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其它常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质数目是X染色体数减1。故能够依据X小体有没有、数目来判定胎儿性别和性别畸形。

Y小体是人类男性体细胞中Y染色体长臂末端显现明亮小体，是由萤光染料染色后显示萤光所致。因而称为Y小体或Y染色质。亦可依据Y小体有没有、数目判定胎儿性别和性别畸形

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三、试验材料

口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。

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四、试验器具和药品

1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。

2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红、盐酸喹吖、Macllvaine氏缓冲液、石蜡。

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五、试验步骤

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1．X小体观察

取材:受检验者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在洁净载玻片上。

固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～30min，空气干燥。

染色制片:滴加1～2滴改良品红于室温下染色10～20min（勿使干燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。

镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重合，无核固缩细胞；并在高倍或油镜下观察。

若使用女性发根细胞，需选取带有毛囊头发（约2cm长），再加一滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。

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人口腔X小体

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X小体形状

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2.Y小体观察

取材固定：

染色制片：制好涂片放入固定液（1份95%乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇处理20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min，自来水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏缓冲液（pH5.4～8.0），覆以盖片。

荧光显微镜检验：用低倍镜，再用高倍镜或油镜观察。整个细胞发出荧光者不计。

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六、试验结果

1.X小体：

油镜下可见X小体为一致密浓染小体。轮廓清楚，约1um，常附着于核膜边缘或靠边内侧，其形态有三角形、卵形、扁平形等。

正常女性间期细胞核中X小体百分比约30%～50%，男性中则偶然可见（2%），且不经典。

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六、试验结果

2．Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发亮荧光小体，直径0.3～0.5um，正常情况下Y小体出现率为25～50%，正常女性无，性异常者，如核型为47，XYY个体，可见两个Y小体。

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七、作业及思索题

1.统计X小体频率，画2～3个经典细胞，示X小体形态和所处部位。

2.计算出现Y小体细胞频率。

3.什么是剂量赔偿效应？

4.Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什么用途？

5.在制片过程中使用HCl酸解目标是什么？

6.为何Barr小体普通出现在核膜边缘？

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