CN109517817B 单元dna组合物的制备方法及dna连结体的制作方法 （株式会社辛普罗根）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN109517817B(45)授权公告日2022.12.09

(21)申请号201811310437.X

(22)申请日2014.09.05

(65)同一申请的已公布的文献号

申请公布号CN109517817A

(43)申请公布日2019.03.26

(30)优先权数据

2014-0086902014.01.21JP

(62)分案原申请数据

201480073826.92014.09.05

(73)专利权人株式会社辛普罗根地址日本兵库县

(72)发明人柘植谦尔板谷光泰

(74)专利代理机构北京市金杜律师事务所

11256

专利代理师杨宏军

(51)Int.CI.

C12N15/10(2006.01)

C12N15/64(2006.01)

审查员艾超仁

权利要求书2页说明书27页序列表48页附图21页

(54)发明名称

单元DNA组合物的制备方法及DNA连结体的制作方法

(57)摘要

CN109517817B本发明提供单元DNA组合物的制备方法及DNA连结体的制作方法。单元DNA组合物的制备方法包括下述工序：准备各自含有连结有附加序列的多个单元DNA中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；和，在准备各溶液后，在单元DNA连结有附加序列的状态下，测定各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序。DNA连结体的制作方法包括下述工序：制备单元DNA组合物的工序、准备载体DNA的工序、用限制性内切酶从制备得到的溶液中的连结有附加序列的单元DNA中除去各附加序列的工序、和在除去工序后将载体

CN109517817B

CN109517817B权利要求书1/2页

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1.单元DNA组合物的制备方法，所述方法包括下述工序：

(1)针对连结有附加序列的多个单元DNA,准备分别含有其中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；

(2)在准备所述各溶液后，在所述单元DNA连结有附加序列的状态下，测定所述各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取所述各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序；和

(3)在工序(2)后通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离的工序。

2.如权利要求1所述的单元DNA组合物的制备方法，其中，工序(3)为制备混合液的工序，所述混合液包含通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离而切割得到的所述多个单元DNA;

所述方法进一步包括下述工序：

(4)在工序(3)后从所述混合液中除去所述附加序列而取得所述单元DNA的工序。

3.如权利要求1所述的单元DNA组合物的制备方法，其中，

所述多个单元DNA包含用于附加序列的除去的限制性内切酶的种类相同的单元DNA组，工序(3)为将包含所述单元DNA组的混合液供于限制性内切酶处理的工序。

4.如权利要求1所述的单元DNA组合物的制备方法，其中，所述连结有附加序列的单元DNA具有环状结构，所述附加序列为具有复制起点的质粒DNA序列。

5.单元DNA组合物的制备方法，所述方法包括下述工序：

(1)针对连结有附加序列的多个单元DNA,准备分别含有其中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；

(2)在准备所述各溶液后，在所述单元DNA连结有附加序列的状态下，测定所述各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取所述各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序；和

(3)在工序(2)后通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离的工序，

其中，所述单元DNA各自的碱基长度和与各单元DNA连结的附加序列的碱基长度的合计总长度的分布的标准偏差为相对于所述总长度平均值而言±20%以内。

6.单元DNA组合物的制备方法，所述方法包括下述工序：

(1)针对连结有附加序列的多个单元DNA,准备分别含有其中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；

(2)在准备所述各溶液后，在所述单元DNA连结有附加序列的状态下，测定所述各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取所述各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序；和

(3)在工序(2)后通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离的工序，

其中，与所述各单元DNA连结的