原核端粒酶的新酶挖掘、功能解析及应用.pdfVIP

摘要

原核生物的端粒酶在维持染色体基因组稳定遗传方面具有重要作用。该酶通过

切割和连接重复的回文序列，产生末端闭合结构线性DNA，解决了染色体“末端复

制降解”问题。同时，这种特殊的末端闭合结构线性DNA也为医疗生产提供了新的

途径，在制造病毒载体、细胞疗法和DNA疫苗方面显示出潜力。但目前发现的原核

端粒酶存在催化效率低、识别系统复杂的问题，难以满足日后生物临床医学的应

用。

本课题通过对现有原核端粒酶结构域系统进化分析和体外功能验证，获得一种

来源于大肠杆菌噬菌体YDC107_2的新原核端粒蛋白序列，根据TelN命名规则，将

新酶命名为TelY。功能验证表明TelY蛋白能够识别特定长度DNA回文序列，在K+

离子的辅助下形成末端闭合发夹结构。进一步研究发现，该酶的识别回文序列的长

度可缩短至20bp，是目前形成发夹结构中识别系统最简单的原核端粒酶。利用

AlphaFold2结构建模，确定TelY产生一对间隔为6bp的瞬时交错切口作为核心催化

区，将20bp回文序列中的催化核心区碱基组合突变，证明了核心催化区对碱基的特

异性与对A、G碱基存在偏好性。酶结构分析发现，TelY的C端结构域对底物具有

非特异性结合，可能参与弯曲底物构象辅助核心催化。此外创建了TelY酶介导的一

种全新DNA存储模式，克服了传统体外信息存储易降解的难题。

本课题通过新酶挖掘获得一种来自大肠杆菌噬菌体的新型原核端粒酶，克服了

传统原核端粒酶催化效率低、识别系统复杂性的问题，并阐述了TelY新酶形成共闭

合结构DNA的碱基特异性，为后续原核端粒酶的研究提供理论基础。与传统的DNA

体外信息存储相比，原核端粒酶介导的DNA存储模式为开发下一代DNA信息存储

提供了多元化的方法。

关键词：原核端粒酶；新酶挖掘；回文序列；闭合末端线性DNA；DNA信息存储

ABSTRACT

Protelomeraseplaysanimportantroleinthestablemaintenanceofchromosomesand

genomesinprokaryotes.Thisenzymesolvestheproblemofchromosomeendreplication

degradationbycuttingandlinkingrepeatedpalindromicsequencestoproducelinearDNA

withclosedendstructure.Atthesametime,thisspecialterminalclosurestructureoflinear

DNAalsoprovidesanewrouteformedicalproduction,showingpotentialinthemanufacture

ofviralvectors,celltherapiesandDNAvaccines.Duetotheproblemthatthecatalytic

efficiencyofprotelomeraseislowerandthecomplexityoftherecognitionsystem,itis

difficulttomeetthefuturebiomedicalclinicalapplication.

AnewprotelomeraseproteinsequencederivedfromE.colibacteriophageYDC107_2

wasobtainedthroughphylogeneticanalysisandfunctionalverificationoftheexisting

protelomerasedomain.ThenewenzymewasnamedTelYaccordingtotheruleoforiginof

TelN.Functionalverifi