医学论文：人参、三七在复方芪术调经散中的高效液相色谱法鉴别.docVIP

?????????????????? 作者：何耀慧　林荣锋　陈剑平　李一圣　黄晓其　赖小平　苏子仁? 【摘要】? 【目的】　建立芪术调经散中人参和三七的鉴别方法。【方法】以三七皂苷r?1和人参皂苷rf为指标，采用高效液相色谱法对芪术调经散中人参和三七进行鉴别。【结果】通过利用人参特征性成分人参皂苷rf和三七特征性成分三七皂苷r?1，并综合人参和三七中共有成分人参皂苷rg?1、人参皂苷re及人参皂苷rb?1，可对芪术调经散中人参和三七进行鉴别。【结论】该方法简便可行，可用于芪术调经散中人参和三七的同时鉴别。? 【关键词】? 人参/化学;　三七/化学;　人参皂苷rf/分析;　三七皂苷r?1/分析;　色谱法，高压液相? 人参和三七均为贵重中药材，人参有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功效，而三七有散瘀止血，消肿定痛的功效??1?。同时含有人参和三七的经典方屡见不鲜，但现有文献尚无有关复方中同时鉴别人参和三七的报道。对于复方制剂，同时鉴别人参和三七是保证其质量的必要条件，而人参和三七含有的成分极为相似，有效成分均为皂苷类成分，均含有人参皂苷rg?1、人参皂苷re及人参皂苷rb?1，为鉴别增加了难度。本文以同时含有人参和三七两味药材，且制备工艺简单的芪术调经散作为研究对象，采用高效液相色谱(hplc)法建立了芪术调经散中人参和三七的鉴别方法，现将研究结果报道如下。? 　　1　 材料? 　　1?1　仪器　? 　　dionex summit高效液相色谱仪(美国戴安公司);hanest d2g?303a水艾科浦u系列纯化水机(重庆颐洋企业发展有限公司);舒美kq5200da型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);bp110s型万分之一电子天平(德国sartorius公司) ;cp225d型十万分之一电子天平(德国sartorius公司)。? 　　1?2　药物与试剂　? 　　人参皂苷rf(中国药品生物制品检定所，批号：111719?200502 );人参皂苷re(中国药品生物制品检定所，批号0754?200013);人参皂苷rg?1(中国药品生物制品检定所，批号：110703?200424);人参皂苷rb?1(中国药品生物制品检定所，批号：110704?200420);三七皂苷r?1(中国药品生物制品检定所，批号：110745?200313);甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。? 　　2　方法和结果? 　　2?1　色谱条件　? 　　色谱柱：waters ymc ods (4?6?mm×50?mm);流动相：以乙腈为流动相a，以水为流动相b;流速为1?0?ml/min，按表1进行梯度洗脱;柱温为27?;检测波长为203?nm。?表1　梯度洗脱曲线? 　　2?2　对照品溶液的制备　? 　　取三七皂苷r?1对照品、人参皂苷rg?1对照品、人参皂苷re对照品、人参皂苷rb?1对照品及人参皂苷rf对照品适量，精密称定，加入甲醇分别制成三七皂苷r?1 0?201?mg/ml、人参皂苷rg?1 0?940?mg/ml、人参皂苷re 0?298?mg/ml、人参皂苷rb?1 0?880?mg/ml及人参皂苷rf 0?335?mg/ml的溶液，即得。? 　　2?3　对照药材溶液的制备　? 　　取人参药材1?g，精密称定，加三氯甲烷40?ml，超声处理1?h，滤过，药渣加适量水湿润后，加水饱和正丁醇10?ml，超声处理30?min，滤过，取上清液加30?ml氨试液，摇匀，放置分层，取上层，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至1?ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得人参对照药材溶液;同法制得三七对照药材溶液。?　　2?4　供试品溶液的制备　? 　　取芪术调经散14?29?g，精密称定，加三氯甲烷100?ml，超声处理1?h，滤过，药渣加适量水湿润后，加水饱和正丁醇100?ml，超声处理30?min，滤过，取上清液加300?ml氨试液，摇匀，放置分层，取上层，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至1?ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得。? 　　2?5　阴性样品溶液的制备　? 　　按本品处方及制备工艺，同供试品溶液的制备方法制得缺人参阴性样品溶液、缺三七阴性样品溶液及缺人参、三七双阴性样品溶液。? 　　2?6　样品测定　? 　　分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10?μl，注入高效液相色谱仪，测定即得。结果见表2、图1。?表2　芪术调经散中皂苷类成分的保留时间由表2和图1可知，人参和三七中含有共同成分人参皂苷rg?1、人参皂苷re及人参皂苷rb?1，三七皂苷r?1为三七的特征性成分，人参皂苷rf为人参中的特征性成分。结果表明，在此高效液相色谱条件下，通过三七的特征性成分三七皂苷r?1和人参的特征性成分人参皂苷rf可有效鉴别芪术调经散中的