水处理系统中氨氧化古菌的检测及其DNA PCR扩增条件优化.docVIP

  水处理系统中氨氧化古菌的检测及其 DNA PCR 扩增条件优化# 5 10 15 20 25 30  摘要：利用克隆文库技术对 4 个不同城市污水处理系统中的 AOA 进行了检测，并针对古菌 的 amoA 基因 PCR 扩增中存在的问题，对 PCR 扩增体系和条件进行了优化，结果 AOA 仅 存在于样品 B 中，表明 AOA 的存在可能与盐度有关。系统发育分析表明同一样品中的 AOA 存在一定的多样性，不同污水处理系统中的 AOA 存在差异。获得的最佳 amoA 基因 PCR 扩 增条件是：使用 Arch_AF 和 Arch_AR 引物对时，退火温度为 42，引物浓度为 0.4 μM， Mg2+浓度为 0.2 mM；使用 Cren_amo_F 和 Cren_amo_R 引物对时，退火温度为 61，引物 浓度为 0.2 μM，Mg2+浓度为 0.2 mM。 关键词：环境微生物学；水处理系统；氨氧化古菌；PCR；克隆文库 中图分类号：X172 Detection of Ammonia Oxidizing Archaea in Water Treatment Systems and Optimization of the DNA PCR Amplification Conditions DING Kun, HU Man, WANG Xiaohui, WEN Xianghua (School of Environment, Tsinghua University, Beijing 100084) Abstract: In this paper, ammonia oxidizing archaea (AOA) in four full-scale wastewater treatment systems was analyzed by molecular detection technology. The amplification system and condition of PCR targetting on archaeal amoA gene had been optimized. The results showed that AOA only existed in sample B, suggesting that AOA may be related to high salinity. Based on the phylogenetic analysis, a certain diversity of AOA in one sample was found, and the pattern of AOA distribution was also various among different wastewater treatment systems. Using the primer pair of Arch_AF and Arch_AR, the optimum condition for archaeal amoA gene amplification was 42 ℃ for annealing temperature, 0.4 μ M for primer concentration and 2.0 mM for Mg2+ concentration. For the primer pair of Cren_amo_F and Cren_amo_R, the optimum annealing temperature was 42 ℃, primer concentration was 0.2 μ M and Mg2+ concentration was also 2.0 mM. Key words: environmental microbiology; water treatment system; ammonia oxidizing archaea; PCR; clone library 35 0 引言 近年来我国水体富营养化问题日趋严重，城市污水排放的氮等物质是导致这一问题的 原因之一，对城市污水进行脱氮处理成为必然趋势。目前，大部分城市污水处理厂均采用 生物法对污水进行脱氮处理。硝化过程是整个脱氮过程的重要步骤。硝化过程又可分为两 40 个阶段，即氨氧化阶段（NH3→NO2-）和亚硝酸盐氧化阶段（NO2-→NO3-）。由于在环境 中几乎不存在亚硝酸盐积累的现象[1]，可以认为氨氧化反应是硝化反应的限速步骤，同时 -1-   也是整个脱氮过程的关键步骤[2, 3]，因此可以发挥氨氧化作用的氨氧化微生物是影响脱氮过 程稳定性的主要微生物。对具有氨氧化功能的微生物群落结构进行深入研究