基因抑制对细胞生长和增殖的影响.pptVIP

第五部分 POLD1基因表达受到抑制后对MCF-7细胞的生长及周期的影响 实验方法 Trizol提取MCF-7细胞总RNA 反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定 细胞转染及稳定表达细胞株的筛选 细胞生长曲线实验 血清依赖性实验 单细胞克隆形成实验 软琼脂集落形成实验 胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞 流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析 Western blot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达 结果与讨论 生长曲线的测定 血清依赖性实验结果 单细胞克隆形成率的比较 软琼脂集落形成比较 TdR 双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化 Western blot检测转染细胞中周期相关基因的表达 引物设计 pXJ41-as-POLD1重组质粒图谱 生长曲线的测定 转染细胞的血清依赖性实验 单细胞克隆形成率的比较 软琼脂集落形成比较 TdR 双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化 Western blot检测转染细胞中周期相关基因的表达 * * 上游： 5’ ATG TTT GGG TAC CAC GGG CAC 3’ 631 gctcccgaga gagcatgttt gggtaccacg ggcacggccc ctccccgttc ctgcgcatca 下