实验：计数法测定细胞生长曲线.docVIP

实验内容：计数法测定细胞生长曲线 作者：王卫东 实验日期：2001.10.24-2001.10.31 实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。 实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相（潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。 仪器、材料和试剂： 仪器：CO2 培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板 材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精 灯 试剂：培养基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶 实验步骤： 细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培养基制成细胞悬液后计数。 接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL培养基，实际接种每瓶5.9×104