医学遗传学基因诊断与治疗.pptVIP

当基因的突变部位和性质已完全明了时，可以合成等位基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide，ASO）用同位素或非同位素标记进行诊断。探针通常为长20bp左右的核苷酸。用于探测点突变时需要合成两种或两种以上的探针，一种与正常基因序列完全一致，能与之稳定地杂交，但不能与突变基因序列杂交；另一种与突变基因序列一致，能与突变基因序列稳定杂交，但不能与正常基因序列稳定杂交，这样，就可以把只有一个碱基发生了突变的基因区别开来。 3. ASO（allele-specific oligonucleotide） PCR可结合ASO，即PCR－ASO技术，即先将含有突变点的基因有关片段进行体外扩增，然后再与ASO探针作点杂交，这样大大简化了方法，节约了时间，而且只要极少量的基因组DNA就可进行。 异常探针 T A G 正常人 患者 DNA DNA 正常人 患者 DNA DNA 杂交结果 点杂交 正常探针 G A G 正常人 患者 DNA DNA 杂交结果 正常人 患者 DNA DNA 点杂交 等位基因特异的寡核苷酸探针(ASO)检测点突变 4、聚合酶链反应 （polymerase chain reaction,PCR） PCR原理 PCR原理 １变性 PCR原理 １复性 PCR原理 １延伸 PCR原理 ２变性 PCR原理 ２复性 PCR原理 ２延伸 PCR原理 ３变性 PCR原理 ３复性 PCR原理 ３延伸 DNA以指数形式扩增(2n)，其中长片段以线性形式扩增 (2n+2)，最终主产物片段长度在两个引物之间。 长片段（单链） 240 16 256 ７ 114 52 22 8 2 0 0 短片段（单链） 14 12 10 8 6 4 2 128 64 32 16 ８ ４ ２ 总片段（单链） ６ ５ ４ ３ ２ １ ０ 循环数 预变性(92-95?C,2-5m) 变性(92-95?C,30s) 复性 (40-60?C,30s) 延伸(72?C,30-60s) 总延伸(72?C,7m) (25-35) PCR的一般过程： 经过30次的循环, 扩增的DNA片段可达100万倍以上。 5、Southern 杂交法 细胞 提取目的基因 限制性内切酶消化 琼脂糖凝胶电泳 观察分析 变性原位转移硝酸纤维滤膜上 探针杂交 放射自显影 基因诊断的临床检测应用 1. 基因诊断在感染性疾病检测中的应用 乙型肝炎病毒（HBV）、人乳头瘤病毒（HPV）： 其DNA可以使用点杂交、PCR方法直接检出。 丙型肝炎病毒（HCV）、人免疫缺陷病毒（HIV）： 其RNA可以使用RT-PCR方法直接检出。 结核杆菌和疟原虫的分型可以使用探针杂交和PCR方法检出。 * * 第十四章 基因诊断 Gene Diagnosis 20世纪40年代发现DNA是遗传物质以及50年代DNA的双螺旋结构被发现，进一步从本质上证实基因是决定人类一切生命现象的物质基础。 现在，人们已经从分子水平上认识到基因是一段能够编码一条到多条肽链氨基酸顺序的DNA。 在第18届国际遗传学大会上，全世界3000名科学家对人类的生老病死做了新诠释——“不论是器质性疾病还是功能性疾病，都有必要在基因水平上去探究病因”。除此之外，人类正常的发育、衰老和死亡，当然也受基因的调控。” 传统的诊断 １、问、望、听、触…—经验型判断的方法。 ２、化验/检验——细胞、组织、大分子、小分子、酶、代谢物；微生物、免疫学、生物化学、病理学等。 ３、影像学—X线、B超、CT、核磁共振、内窥镜等。 ４、特殊检查—染色体检查、肌电/脑电/心电、骨密度、原子吸收光谱等。 随着技术水平的发展，这些诊断方法也在不断的提高和完善，在医学实践中发挥了巨大的作用。并还将有更先进的方法问世。 但这些方法大多存在一个无法克服的缺陷：不可预先诊断。 随着分子生物学和分子遗传学的发展，越来越多的证据表明，绝大多数疾病的发生和发展都与患者的遗传物质结构和功能改变有关，所以遗传物质的检查越来越显得必要。 基因诊断的定义 应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构和功能变化而作出的或辅助临床诊断的技术，称为基因诊断。 基因诊断具有灵敏度高、特异性强、费用低，并对许多疾病特别是遗传性疾病做出预先诊断的优点。它是一种极具发展潜力的诊断方法。 由于基因诊断发展的时间不长，人们对于基因，特