UHRF1 基因在人卵巢癌细胞株OVCAR-3 中的表达及意义.docVIP

UHRF1基因在人卵巢癌细胞株OVCAR-3中的表达及意义 周碧芳 邓斐 周学惠 吴强 江苏省肿瘤医院妇瘤科 210009 【摘要】 目的 探讨UHRF1基因在人卵巢癌细胞株OVCAR-3中的表达及其生物学意义。方法 利用小干扰RNA基因沉默技术，将体外化学合成的针对UHRF1基因的siRNA转染至人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞；实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染前后细胞UHRF1 mRNA和蛋白表达水平的变化；CCK-8实验和流式细胞术分别检测沉默UHRF1基因后对细胞增殖和凋亡的影响。结果 实时荧光定量PCR结果显示，siRNA转染后UHRF1基因在卵巢癌细胞株OVCAR-3中表达显著降低 ( P 0. 01 )；Western blot结果显示，siRNA转染后，转染组、阴性对照组和空白组细胞UHRF1蛋白表达量与β-actin蛋白表达量相对比分别为0. 16 ± 0. 04、0. 33 ± 0. 03、0. 35 ± 0. 07。转染组细胞UHRF1蛋白表达水平低于阴性对照组和空白组，差异具有统计学意义 ( P 0. 05 )，而阴性对照组和空白组相比，差异无统计学意义 ( P 0. 05 )；CCK-8实验和流式细胞术结果表明，UHRF1基因沉默后对细胞增殖产生了抑制作用，表现为在转染的第二天、第三天和第四天，转染组细胞增殖率都要低于空白组，差异具有显著的统计学意义 ( P 0. 01 )。同时，抑制UHRF1基因的表达可以促进细胞的凋亡，转染组、阴性对照组和空白组细胞的凋亡率分别为( 64. 97 ± 2. 22 ) %、 ( 28. 57 ± 2. 93 ) %、 ( 27. 75 ± 1. 07 ) %，差异具有显著性意义 ( P 0.01 )。结论 利用小干扰RNA基因沉默技术，UHRF1基因沉默后可以显著抑制卵巢癌OVCAR-3细胞UHRF1的表达，这为研究UHRF1基因作为卵巢癌新的诊断和治疗的靶标提供了基础和依据。 【关键词】 UHRF1基因；卵巢癌；OVCAR-3细胞株；RNA干扰 Expression of UHRF1 in ovarian cancer cell line OVCAR-3 and its significance Zhou Bifang, Deng Fei, Zhou Xuehui, Wu Qiang Department of Gynecological Oncology ,Cancer Hospital of Jiangsu Province, Nanjing 210009, China. 【Abstract】 Objective To investigate the expression of UHRF1 gene in human ovarian cancer cell line OVCAR-3 and its biological significance. Methods Using the siRNA gene silencing technique, chemical synthesis small interfering RNA for UHRF1 gene sequence were transfected into the human ovarian cancer cell line OVCAR-3；Real-time quantitative PCR and Western blot assay separately was used to compare the mRNA and protein level of UHRF1 before and after siRNA transfection; CCK-8 assay and flow cytometry were used to investigate the cell proliferation and cell apoptosis after UHRF1 gene silencing. Results As the Real-time quantitative PCR results shown, the expression of UHRF1 was significantly decreased in the cells of OVCAR-3 after the transfection of siRNA ( P 0. 01 )；As the Western blot results shown, the relative expression between the UH