犬瘟热病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立.pdfVIP

第 35卷 第 8期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．35．No．8 2013年 8 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Aug． 2013 doi：10．39698．issn．1008—0589．2013．08．08 犬瘟热病毒单克隆抗体夹心 ELISA检测方法的建立 孙 婧 ，一，毕振威 ，夏兴霞 ，王晓丽 ，诸玉梅 ，董晨红 ，贾 红 ，朱瑞 良 ，王永山 (1．山东农业大学 动物科技学院，山东 泰安271018；2．江苏省农业科学院兽医研究所 ／农业部兽用生物制品工程技术 重点实验室，江苏 南京 210014；3．中国农业科学院 北京畜牧兽医研究所 ，北京 100193) 摘 要：为建立方便快捷的犬瘟热病毒(CDv)检测方法，本实验应用杂交瘤细胞融合技术，建立了4株分泌 抗 CDV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株，分别命名为A2、F7、H4和 G12。相加 ELISA试验显示 4株MAb作 用于CDV不同的抗原表位。选取相加指数较高的两株MAbG12和A2分别作为捕获抗体和酶标检测抗体，建立 检测CDV的夹心ELISA检测方法，并对实验条件进行了优化。结果显示，该方法与犬细小病毒、犬副流感病 毒、犬腺病毒 1型、犬冠状病毒等犬类病毒无交叉反应，敏感度为5i*g／mL，变异系数小于6％。利用该方法与 RT．PCR方法同时检测 57份临床样 品，两种方法的符合率为 100％。本实验建立的MAb夹心 ELISA方法具有特 异、敏感、方便快捷等优点，适用于大批量临床样品检测。 关键词：犬瘟热病毒；杂交瘤细胞株；单克隆抗体；夹心ELISA 中图分类号：$852．65 文献标识码：A 文章编号：1008—0589(2013)08．0635．05 DevelopmentofasandwichELISA basedonmonoclonal antibodiesagainstcaninedistempervirus SUN Jing ，BIZhen-wei，XL Xing-xia，WANG Xiao—li，ZHU Yu—mei，DONG Chen-hong2， JIA Hong，ZHU R_ui—liang ，W ANG Yong-shan (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，ShnadongAgriculturalUniversity，Tai’an271018，China；2．KeyLaboratoryofVeterinary BiologicalEngineeringnadTechnology，MinistryofAgricultural，InstituteofVeterinaryMedicine，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences Nanjing210014，China；3．InstituteofAn imalSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China) Abstract：Todevelopamethodforthedetectionofcaninedistempervirus(CDV)，fourhybridomaofA2，F7，H4andG12 secretingmonoclonalantibodies(MAb)toCDVwerepreparedbyhtefusionofSP20／cellsandsplenocytefrom BALBC／mice immunizedwiht htepurifiedCDV ．AdditivityELISA revealedhtatthefourMAbsrecognizedspatially independentepitopesof CDV．Inaddition，asandwichELISA wasestablishedwihtMAbG12ascaptureantibodyandHRPc